CN102985410A - 在癌症的治疗中使用的考布他汀类似物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及特定的考布他汀类似物，特别是本文所描述和定义的式(I)的化合物，和包括所述化合物的药物组合物，以及它们的医疗用途，特别是在包括多药耐药癌症在内的癌症的治疗和预防中的医疗用途。

Description

在癌症的治疗中使用的考布他汀类似物
本发明涉及特定的考布他汀(combretastatin)类似物，特别是本文所定义的式(I)的化合物，和包括所述化合物的药物组合物，以及它们的医疗用途，特别是在包括多药耐药癌症在内的癌症的治疗和预防中的医疗用途。
癌症的化学治疗一般受显示出对一系列化学抗肿瘤剂耐受性(固有的或经重复施用获得的)的恶性肿瘤的高发病率的限制。目前，没有临床上确立的能够克服这种所谓的多药耐药性的化学治疗剂。此类情况的替代治疗也是不可获得的。
血管毒性的(angiotoxic)、天然存在的先导化合物考布他汀A-4(CA-4)的水溶性磷酸盐前体药物已进入针对多种不可治愈的癌症疾病的临床II期和III期试验。
Figure BDA00002701598500011
考布他汀-A4
CA-4及其类似物具有强细胞毒性并且选择性地破坏肿瘤血管或阻止其新生作用(分别称为抗血管作用或抗血管生成作用)。它们还结合微管蛋白并抑制其聚合，从而阻碍细胞增殖(抗有丝分裂作用)。结合来看，这些作用导致肿瘤细胞增殖的抑制和实体瘤的生长和扩散(侵入，转移)的抑制。
CA-4的缺点是其细胞毒性不足，这使得在实体瘤的治疗中与卡铂或紫杉醇的组合方案成为必要。单独用CA-4治疗常常导致外周癌细胞的留存并因此导致肿瘤复发(Tron等人，J.Med.Chem.2006，49，3033-3044；Lippert，Bioorg.Med.Chem.2007，15，605-615)。相关的CA-1及其二磷酸盐前体药物OXi4503由于其儿茶酚部分而也在某些肿瘤模型中具有令人印象深刻的效果。儿茶酚已知经历经由醌型中间体的氧化还原循环从而介导活性氧(ROS)的产生和生物亲核体(bionucleophile)的烷基化(Holwell等人，Anticancer Res.2002，22，3933-40；Folkes等人，Chem.Res.Toxicol.2007，20，1885-1894)。
CA-4的体内细胞毒性不足的问题通过开发对癌细胞具有直接影响的考布他汀A-1二磷酸盐而克服。然而，像CA-4一样，这种化合物易于异构化并因此失活。临床前研究揭示这种异构化可通过用五元杂环诸如噁唑或咪唑代替烯烃桥而消除。(Wang等人，J.Med.Chem.2002，45，1697-1711)。所得产物的特征在于在体内改进的水溶性和适用性而不需要前体药物制剂。在另一项研究中，CA-4类似的3-卤代均二苯乙烯(3-halostilbene)显示具有增强的对微管蛋白的亲和力和选择性更强的效力特征(Pettit等人，J.Nat.Prod.2005，68，1450-1458)。类似的化合物另外公开于：WO 01/09103；Vasilevsky等人，Chemistry of Heterocyclic Compounds，2008，44(10)，1257-1261；Orsini等人，Natural stilbenes and analoga asantineoμLastic agents，在：Atta-ur-Rahman，Studies in Natural ProductsChemistry，Bioactive Natural Products，Part N，2008，34卷中；Brown等人，Top.Heterocycl.Chem.2006，2，1-51；Kiss LE等人，J Med Chem，2010，53(8)，3396-411；和Ohsumi K等人，Bioorg Med Chem Lett，1998，8(22)，3153-8。
与由Wang等人或Pettit等人制备的那些化合物类似的化合物仅满足对于最佳抗肿瘤效力的一些需要而不是全部需要。令人想起由Wang等人描述的那些化合物的衍生物的特征为有利的药理学特性但减少的微管蛋白亲和力和不足以有效地治疗耐药肿瘤的细胞毒性(CA-4的细胞毒性的约1/100)。另一方面，具有增加的细胞毒性的化合物显示不利的药理学特性和缺少的抗血管效力和抗耐药肿瘤的活性。在由Pettit等人公开的3-卤代考布他汀-A衍生物中存在一些具有显著的细胞毒性特性的衍生物。然而，由于其均二苯乙烯性质及其缺乏稳定的杂环桥，它们往往异构化而丧失抗癌活性。此外，除非被转化成磷酸酯，否则它们在水中的溶解度以及如此它们在体内的应用性是相当有限的。它们不适合于用体内模型测试。而且，Wang等人和Pettit等人描述的化合物在多药耐药癌症的治疗中尤其是在CA-4难治性癌症的治疗中的效力没有被检验。
所以，对于癌症尤其是多药耐药癌症的治疗或预防的改进方法存在强烈的需求。
如本文以下所定义的式(I)、式(II)或式(III)的化合物具有改进的针对癌症尤其是针对耐药肿瘤细胞的效力以及充足的在水中或血清中的溶解度。它们一般具有低毒性，这避免累积剂量限制并导致改进的耐受性。此外，它们具有改进的化学稳定性和由此减少的失活倾向性。
因此，本发明涉及式(I)的化合物
Figure BDA00002701598500031
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物。
X选自O、S、N(H)或N(C1-4烷基)。优选地，X选自O或N(C1-4烷基)。更优选地，X选自O或N(CH3)。
R1选自卤素、-CN、-CF3、-NH2、-NH(C1-4烷基)、或-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)。优选地，R1选自卤素(诸如，例如-F、-Cl或-Br)，或-NH2。更优选地，R1选自-Cl、-Br或-NH2。最优选地，R1选自-Cl或-Br。
R2选自氢、卤素、-CN、-CF3、-OH、-O(C1-4烷基)、-NH2、-NH(C1-4烷基)、或-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)。优选地，R2选自氢、卤素(诸如，例如，-F、-Cl、或-Br)、-OH、或-NH2。更优选地，R2选自-F、-OH、或-NH2。
R3选自-OH、-O(C1-4烷基)、-SH、-S(C1-4烷基)、-NH2、-NH(C1-4烷基)、或-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)。优选地，R3选自-O(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)。更优选地，R3选自-O-CH3、-O-CH2-CH3或-N(CH3)2，尤其选自-O-CH3或-N(CH3)2。
可选地，R2和R3共同形成基团-C(卤素)＝CH-N(CH3)-，其中该卤素优选地选自-F、-Cl或-Br，且更优选地该卤素是-Cl。即，R2和R3与它们所连接的碳原子一起形成五元环，其中R2和R3一起是二价基团-C(卤素)＝CH-N(CH3)-或优选为基团-C(Cl)＝CH-N(CH3)-。
因此，式(I)的化合物可具有以下结构：
Figure BDA00002701598500041
其中卤素可以是，例如-F、-Cl或-Br，且优选地为-Cl，且其他基团X和R1如以上所定义。
在优选的实施方案中，R2是-NH2且R3是-O-CH3。在另一优选的实施方案中，X是O或N(CH3)，R1是-NH2或卤素(诸如，例如，-F、-Cl或-Br)，R2是-NH2，且R3是-O-CH3。因此，优选的式(I)的化合物是1-甲基-5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-4-(3-氯-4，5-二甲氧基苯基)-咪唑(还称为“5b”或“化合物5b”)。另一种优选的式(I)的化合物是1-甲基-5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-4-(3-溴-4，5-二甲氧基苯基)-咪唑(还称为“6b”或“化合物6b”)。
在另一优选的实施方案中，R2是-NH2且R3是-O-CH2-CH3。在更优选的实施方案中，X是O或N(CH3)，R1是-NH2或卤素(诸如，例如，-F，-Cl或-Br)，R2是-NH2，且R3是-O-CH2-CH3。因此，特别优选的式(I)的化合物是1-甲基-5-(3-氨基-4-乙氧基苯基)-4-(3-氯-4，5-二甲氧基苯基)-咪唑(即，1-甲基-5-(3″-氨基-4″-乙氧基苯基)-4-(3′-氯-4′，5′-二甲氧基苯基)-咪唑；还称为“5f”或“化合物5f”)和1-甲基-5-(3-氨基-4-乙氧基苯基)-4-(3-溴-4，5-二甲氧基苯基)-咪唑(即，1-甲基-5-(3″-氨基-4″-乙氧基苯基)-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-咪唑；还称为“6f”或“化合物6f”)。
在另一优选的实施方案中，R2是-F且R3是-O-CH3或-O-CH2-CH3。在另一优选的实施方案中，X是O或N(CH3)，R1是-NH2或卤素(诸如，例如，-Cl或-Br)，R2是-F，且R3是-O-CH3或-O-CH2-CH3。因此，优选的式(I)的化合物是1-甲基-4-(3-氯-4，5-二甲氧基苯基)-5-(3-氟-4-乙氧基苯基)-咪唑(还称为“5g”或“化合物5g”)和1-甲基-4-(3-溴-4，5-二甲氧基苯基)-5-(3-氟-4-乙氧基苯基)-咪唑(还称为“6g”或“化合物6g”)。
另一优选的式(I)的化合物是1-甲基-4-(3-氨基-4，5-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3-氯吲哚-5-基)-咪唑(即，1-甲基-4-(3′-氨基-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3″-氯吲哚-5″-基)-咪唑；还称为“8e”或“化合物8e”)、1-甲基-4-(3′-氯-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3″-氯吲哚-5″-基)-咪唑(还称为“5i”或“化合物5i”)和1-甲基-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3″-氯吲哚-5″-基)-咪唑(还称为“6i”或“化合物6i”)。
Figure BDA00002701598500051
本发明还提供了式(II)的化合物
Figure BDA00002701598500052
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物。
X2选自O、S、N(H)或N(C1-4烷基)。优选地，X2选自O或N(C1-4烷基)。更优选地，X2选自O或N(CH3)。
R21选自卤素、-CN、-CF3、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)。优选地，R21选自卤素(诸如，例如，-F、-Cl或-Br)，或-NH2。更优选地，R21选自-Cl、-Br、或-NH2。最优选地，R21选自-Cl或-Br。
R22是C1-4烷基。优选地，R22是C2-4烷基。更优选地R22是乙基。
包含在式(II)的化合物中的基团“卤素”优选地选自-F、-Cl或-Br，且更优选地，“卤素”是-Cl。
优选的式(II)的化合物是1-甲基-4-(3-氨基-4，5-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3-氯吲哚-5-基)-咪唑、1-甲基-4-(3′-氯-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3″-氯吲哚-5″-基)-咪唑和1-甲基-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3″-氯吲哚-5″-基)-咪唑。特别优选的式(II)的化合物是1-甲基-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3″-氯吲哚-5″-基)-咪唑(还称为“6h”或化合物6h)。
Figure BDA00002701598500061
本发明还提供了式(III)的化合物
Figure BDA00002701598500062
或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物。
X3选自O、S、N(H)或(C1-4烷基)。优选地，X3选自O或N(C1-4烷基)。更优选地，X3选自O或N(CH3)。
R3选自卤素(尤其是-Cl、-Br或-I)、-CN、-CF3、-NH2、-NH(C1-4烷基)、或-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)。优选地，R31选自-Cl、-Br、-I、或-NH2。更优选地，R31选自-Br、-I或-NH2。最优选地R31选自-Br或-I。
R32选自氢、卤素、-CN、-CF3、-OH、-O(C1-4烷基)、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)。优选地R32选自氢、卤素(诸如，例如-F、-Cl或-Br)、-OH或-NH2。更优选地，R32选自-F、-OH或-NH2。最优选地，R32是-F。
R33选自-OH、-O(C1-4烷基)、-SH、-S(C1-4烷基)、-NH2、-NH(C1-4烷基)、或-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)。优选地，R33选自-O(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)。更优选地，R33选自-O-CH3、-O-CH2-CH3或-N(CH3)2。最优选地，R33选自-O-CH3或-O-CH2-CH3。
可选地，R32和R33共同形成基团-C(卤素)＝CH-N(C1-4烷基)-。包含在该基团中的C1-4烷基优选地选自甲基或乙基。包含在该基团中的卤素优选地选自-F、-Cl或-Br，且更优选地卤素是-Cl。即，R32和R33与它们所连接的碳原子一起形成5元环，其中R32和R33一起是二价基团-C(卤素)＝CH-N(C1-4烷基)-。特别优选的是R32和R33共同形成基团-C(卤素)＝CH-N(CH3)-或基团-C(卤素)＝CH-N(CH2CH3)-，其中在每种情况下卤素优选地选自-F、-Cl或-Br，且更优选地卤素是-Cl。
R34选自-OH、-O(C1-4烷基)、-SH、-S(C1-4烷基)、卤素(尤其是-Cl、-Br或-I)、-CN、-CF3、-NH2、-NH(C1-4烷基)、或-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)。优选地R34选自-O(C1-4烷基)、-Cl、-Br、-I、或-NH2。更优选地，34选自-O-CH3、-O-CH2-CH3、-Br、-I、或-NH2。最优选地，R34选自-O-CH3、-Br或-I。
在优选的实施方案中，R32是-F且R33是-O-CH3。在另一优选的实施方案中，X3是N(CH3)，R31是-Br或-I，R32是-F，R33是-O-CH3，且R34是-O-CH3、-Br或-I。特别优选的式(III)的化合物是以下化合物9a、9b和9c：
Figure BDA00002701598500081
如本文所用，术语“烷基”是指单价饱和的脂肪族(即非芳族)非环状烃基(即，由碳原子和氢原子组成的基团)，其可以是直链的或支链的且不包括任何碳碳双键或任何碳碳三键。因此，术语“C1-4烷基”是指甲基、乙基、丙基(例如正丙基或异丙基)、或丁基(例如正丁基、异丁基、叔丁基或仲丁基)。
如本文所用，术语“卤素”是指-F、-Cl、-Br或-I，且尤其是指-F、-Cl或-Br。
本发明还涉及包含与药学上可接受的赋形剂联合的如本文所定义的式(I)、(II)或(III)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物的药物组合物。因此，式(I)、(II)或(III)的化合物作为药物是有用的。
本发明还涉及用于治疗或预防癌症的如本文所定义的式(I)、(II)或(III)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物，或包含与药学上可接受的赋形剂联合的上述实体中的任何一种的药物组合物。以上化合物用于制备治疗或预防癌症的药物的用途也在本发明的范围之内。
此外，本发明包括治疗或预防癌症的方法，上述方法包括向需要这种治疗或预防的受治疗者施用如本文所定义的式(I)、(II)或(III)的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物，或包含与药学上可接受的赋形剂联合的上述实体中的任何一种的药物组合物。
有待用根据本发明的化合物或药物组合物治疗或预防的癌症包括例如乳腺(乳房)癌、泌尿生殖系癌(诸如，例如包括激素难治性前列腺肿瘤的前列腺肿瘤，或生殖细胞癌)、肺癌(诸如，例如小细胞肺肿瘤或非小细胞肺肿瘤)、胃肠癌(诸如，例如，肝细胞癌、结肠直肠癌、结肠癌或胃癌)、表皮样癌(诸如，例如表皮样头和/或颈肿瘤或口腔肿瘤)、黑色素瘤、卵巢癌、胰腺癌、成神经细胞瘤、头和/或颈癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、白血病(诸如，例如淋巴细胞白血病或髓细胞性白血病)或淋巴瘤。
特别优选的是有待用根据本发明的化合物或药物组合物预防或治疗的癌症是多药耐药癌症。有待治疗的癌症因此可以是上述癌症的多药耐药形式。在本发明的优选实施方案中，有待用本文所提供的化合物或药物组合物治疗或预防的癌症是对考布他汀A-4和/或顺铂耐受的。因此，在本发明中，特别设想了考布他汀A-4(CA-4)难治性癌症或顺铂难治性癌症的治疗或预防。
已发现根据本发明的化合物在多药耐药癌症且尤其是CA4难治性癌症的医学介入中出人意料地有效，这已在体外或体内显示，包括在小鼠异种移植物模型中(参看实施例3和图3、4和5)。
已显示新化合物表现出显著的细胞毒性、抗血管生成/抗血管和抗有丝分裂作用。此外，在新化合物分子结构中的咪唑/噁唑桥在芳烃环之间产生稳定的C＝C双键顺式构型并因此产生高度的化学和药理学稳定性。反式均二苯乙烯的任何异构化同时丧失抗肿瘤活性不再可能。而且，它们的极性取代基使得新化合物在水中的可溶性非常好且可如此直接地应用而不采用载体。这些化合物可通过作为生理学盐水溶液中的溶液注射而施用。此类溶液显示在室温条件下稳定至少一个月而没有任何可注意到的活性损失。在多药耐药肿瘤模型的动物研究中，发现新化合物具有抗肿瘤活性，引起肿瘤异种移植物的急剧消退。强烈的抗血管作用选择性地影响肿瘤血管通过肿瘤组织的可见出血而得到明确证实。当新化合物以有效浓度应用时，没有观察到不想要的副作用。这说明了它们高度的肿瘤选择性及其优异的体内耐受性。因此如本文所述的式(I)、(II)或(III)的化合物在特定位置连接特别的环取代基导致增强的抗肿瘤活性、改进的药理学特性以及优异的体内耐受性和克服肿瘤化学抗性的潜力。此外，已出人意料地发现本发明的化合物表现出由高细胞毒性和选择性影响肿瘤血管的强烈的抗血管作用的组合产生的协同作用，如还在实施例中显示的。
在式(I)的R1中的卤素取代基的性质对于根据本发明的化合物的选择性及其生物活性的大小是关键的。与其氯同源物(congener)5b(实施例4中显示的结构)不同，溴咪唑6b在肿瘤异种移植物中是血管破坏性的而仅在鸡胚中留下规则的血管(CAM测定)。本发明的化合物特征还在于杰出的肿瘤选择性细胞毒性和对癌细胞凋亡的强烈诱导。
包括式(I)的化合物的本发明的化合物还具有关于在水中的溶解度和在溶液中的化学稳定性方面的有利特性，如还在实施例3以及图1和图2中所显示的。例如，根据本发明的化合物5b、6b和8a在水中的溶解度超过10mg/mL的浓度。因此，这些化合物甚至比考布他汀A-4-磷酸钾盐的水溶性更大(约5mg/mL；Bedford等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.1996，6，157-160)。同样由于这个原因，包括式(I)的化合物的本发明的化合物作为药物包括作为癌症的治疗或预防中的药物是特别稳定和有效的。
因此，本发明的化合物在细胞毒性、在水中的溶解度和化学稳定性方面是特别有利的，如在根据本发明的化合物5b的附属实施例中所示的。具体地说，化合物5b在体外和体内具有高细胞毒性(在CA-4和顺铂耐受的细胞系中也如此)，与CA-4-磷酸盐相比显示改进的水溶解度且不像CA-4一样能够异构化成失活的反式异构体。然而，化合物5b在小鼠异种移植物中具有良好的耐受性和选择性。本发明的化合物因此可无需前体药物形式诸如用于考布他汀-A4的磷酸盐前体药物形式而施用。然而，在一个实施方案中，如果需要的话，可使用前体药物。
对于合成化学领域的技术人员来说，各种用于制备包括式(I)、(II)或(III)的化合物的本发明的化合物的途径将是容易明白的。例如，可根据以下一般方案制备式(I)的化合物。
首先，制备对应的对甲苯磺酰甲基异氰化物(para-toluenesulfonylmethylisocyanide)(TosMIC衍生物)(方案1)。将商购的5-氯香草醛或5-溴香草醛1a/b与碘甲烷和碳酸钾反应以给出藜芦醛2a/b，藜芦醛2a/b通过在樟脑磺酸的存在下与对甲苯亚磺酸和甲酰胺反应而被转化成甲苯磺酰基甲基甲酰胺(tosylmethylformamide)3a/b。以同样的方式，将通过香草醛与发烟硝酸反应而获得的在乙酸中的5-硝基香草醛(1c)甲基化以给出藜芦醛2c，将藜芦醛2c转化成甲酰胺3c。随后，通过用三氯氧化磷(phosphoroxychloride)处理，将甲酰胺3脱水成3取代的TosMIC衍生物4。
Figure BDA00002701598500111
方案1：对甲苯磺酰甲基异氰化物4的合成。试剂和条件：(i)CH3I，K2CO3，TBAI，DMF，20℃，24h，80-90％；(ii)HCONH2，樟脑磺酸，对甲苯亚磺酸，60℃，16h，51-58％；(iii)POCl3，Et3N，DME，-5℃，3h，57-74％。
通过在二甲氧基乙烷/乙醇混合物中与芳醛或从芳醛产生的亚胺反应，将卤素取代的TosMIC衍生物4a/b转化成咪唑5/6(方案2)。硝基用Zn/HCl选择性还原分别提供期望的胺5b或6b。用3M HCl/二噁烷处理咪唑5a-d和6b-d产生各自的水溶性盐酸盐。
Figure BDA00002701598500112
方案2：N-甲基咪唑桥接的考布他汀A4-类似物的合成。试剂和条件：(i)ArCHO，CH3NH2(在乙醇中33％)，CH3CO2H，乙醇，回流，2h；然后4a/b，K2CO3，二甲氧基乙烷/乙醇，回流，6h，52-99％；(ii)Zn，HCl，THF，20℃，10min，40-91％。
类似于咪唑5/6从硝基-TosMIC衍生物4c和相应的醛和亚胺中制备硝基取代的化合物7a-e(方案3)。通过Pd催化的转移加氢获得胺8a-e。用Zn/HCl将3-氯吲哚7e还原成胺8e。可将化合物8进一步转化成水溶性盐酸盐。
Figure BDA00002701598500121
方案3：水溶性氨基取代的噁唑和N-甲基咪唑8的合成。试剂和条件：(i)ArCHO，K2CO3，二甲氧基乙烷/CH3OH，回流，2h，42-86％(对于X＝O)；ArCHO，CH3NH2(在乙醇中33％)，CH3CO2H，乙醇，回流，2h；然后4c，K2CO3二甲氧基乙烷/乙醇，回流，6h，64-74％(对于X＝NCH3)；(ii)HCO2NH4，Pd/C(5％)，CH3OH，回流，2h，67-84％(对于8a-d)；Zn，HCl，THF，20℃，10min，64％(对于8e)。
如下制备化合物5e-g和6e-g(方案4)。用MeNH2处理4-乙氧基-3-硝基/氟苯甲醛给出亚胺中间体，亚胺中间体与TosMIC试剂4a/b在碱性条件下反应给出N-甲基-咪唑5e，g和6e，g。通过在THF中用Zn/HCl还原5e/6e完成胺5f和6f的制备。可例如通过用3M HCl/二噁烷处理，将这些化合物转化成盐酸盐。
Figure BDA00002701598500131
方案4：化合物5e-g和6e-g的合成。试剂和条件：(i)基本纯的ArCHO，MeNH2，AcOH，EtOH，回流，2h，然后4a/b，K2CO3，EtOH，回流，3h；(ii)Zn，HCl，THF，室温，15min，然后3M HCl/二噁烷，DC，室温，15min。
此外，还可以与在Wang等人，J.Med.Chem.2002，45，1697-1711中描述的合成路线类似的合成路线制备式(I)的化合物。
根据以上所述的和/或实施例中的合成或与其类似地制备式(II)或式(III)的化合物。特别地，式(III)的化合物还可以根据以下一般方案制备。
如下制备化合物9a-c(方案5)。用MeNH2分别处理3-溴-4，5-二甲氧基-苯甲醛、3，5-二溴-4-甲氧基苯甲醛和3，5-二碘-4-甲氧基苯甲醛给出亚胺中间体，亚胺中间体在碱性条件下与TosMIC试剂4d反应给出N-甲基咪唑9a-c。可例如通过用3M HCl/二噁烷处理，将这些化合物转化成盐酸盐。
Figure BDA00002701598500132
方案5：化合物9a-c的合成。试剂和条件：(i)基本纯的ArCHO，MeNH2，AcOH，EtOH，回流，2h，然后4d，K2CO3，EtOH，回流，3h。
本发明的范围包括本发明的化合物尤其是式(I)、(II)或(III)的化合物的所有药学上可接受的盐形式，这些药学上可接受的盐形式可例如通过用无机酸或有机酸使对质子化敏感的携带电子孤对的原子诸如氨基质子化或作为羧酸基团与生理学上可接受的阳离子的盐而形成，正如它们是本领域熟知的。示例性的碱加成盐包括例如碱金属盐诸如钠盐或钾盐；碱土金属盐诸如钙盐或镁盐；铵盐；脂肪族胺盐诸如三甲胺、三乙胺、二环己胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、普鲁卡因盐、葡甲胺盐、二乙醇胺盐或乙二胺盐；芳烷基胺盐诸如N，N-二苄基乙二胺盐、苯乙苄胺；杂环芳族胺盐诸如吡啶盐、甲基吡啶盐、喹啉盐或异喹啉盐；季铵盐诸如四甲铵盐、四乙铵盐、苄基三甲铵盐、苄基三乙铵盐、苄基三丁铵盐、甲基三辛基铵盐或四丁铵盐；以及碱性氨基酸盐诸如精氨酸盐或赖氨酸盐。示例性酸加成盐包括例如无机酸盐诸如盐酸盐、溴氢酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐(诸如，例如磷酸盐、磷酸氢盐或磷酸二氢盐)、碳酸盐、碳酸氢盐或高氯酸盐；有机酸盐诸如乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、戊酸盐、己酸盐、庚酸盐、辛酸盐、环戊丙酸盐、十一酸盐、乳酸盐、马来酸盐、草酸盐、延胡索酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、烟酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐或抗坏血酸盐；磺酸盐诸如甲磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐(p-toluenesulfonate)(对甲苯磺酸盐(tosylate))、2-萘磺酸盐、3-苯基磺酸盐或樟脑磺酸盐；以及酸性氨基酸盐诸如天冬氨酸盐或谷氨酸盐。
而且，本发明的范围包括处于任何溶剂化形式或处于任何多晶型形式的式(I)、(II)或(III)的化合物的固体形式，所述溶剂化形式包括例如与水的溶剂合物，例如水合物，或与有机溶剂诸如例如甲醇、乙醇或乙腈的溶剂合物，即分别为甲醇合物(methanolate)、乙醇合物(ethanolate)或乙腈合物(acetonitrilate)。
此外，在本申请中的化学式旨在覆盖所有可能的立体异构体，包括所示化合物的对映体和非对映体。
因此，式(I)、(II)或(III)的化合物的所有立体异构体被考虑作为本发明的一部分，或者在混合物中或者处于纯的或基本纯的形式。根据本发明的化合物的范围包括所有可能的立体异构体及其混合物。根据本发明的化合物的范围特别包括外消旋形式和分离的光学异构体。外消旋形式可通过物理方法诸如例如非对映衍生物的分级结晶、分离或结晶或通过手性柱色谱分离来拆分。个体光学异构体可使用常规方法诸如例如与光学活性酸的形成盐接着结晶而从外消旋体中获得。
式(I)、(II)或(III)的化合物的药学上可接受的前体药物是具有可经化学或代谢裂解的基团并且通过溶剂分解或在生理学条件下变成在体内有药学活性的本发明的化合物的衍生物。式(I)、(II)或(III)的化合物的前体药物可以用化合物的官能团诸如用氨基或羟基以常规方式形成。前体药物衍生物通常提供溶解度、组织相容性或在哺乳动物生物中延迟释放的优点(参见Bundgaard，H.，Design of Prodrugs，第7-9，21-24页，Elsevier，Amsterdam1985)。当本发明中采用的化合物具有羟基时，通过使羟基与适合的酰卤或适合的酸酐反应而制备的酰氧基衍生物作为前体药物的示例。特别优选的作为前体药物的酰氧基衍生物是-OC(＝O)-CH3、-OC(＝O)-C2H5、-OC(＝O)-(tert-Bu)、-OC(＝O)-C15H31、-OC(＝O)-(m-COONa-Ph)、-OC(＝O)-CH2CH2COONa、-O(C＝O)-CH(NH2)CH3或-OC(＝O)-CH2-N(CH3)2。当本发明中采用的化合物具有氨基时，通过使氨基与适合的酰卤或适合的混合酸酐反应而制备的酰胺衍生物作为前体药物的示例。特别优选的作为前体药物的酰胺衍生物是-NHC(＝O)-(CH2)2OCH3或-NHC(＝O)-CH(NH2)CH3。因此，式(I)的化合物可用作前体药物，其中该前体药物是式(I)的化合物，其中一个或多个氨基如果存在的话是酰胺的形式诸如例如-NHC(＝O)-(CH2)2OCH3或-NHC(＝O)-CH(NH2)CH3的形式，或者其中一个或多个羟基如果存在的话是酰氧基的形式诸如例如-OC(＝O)-CH3、-OC(＝O)-C2H5、-OC(＝O)-(tert-Bu)、-OC(＝O)-C15H31、-OC(＝O)-(m-COONa-Ph)、-OC(＝O)-CH2CH2COONa、-O(C＝O)-CH(NH2)CH3或-OC(＝O)-CH2-N(CH3)2的形式或磷酸酯(phosphate)的形式(即-O-P(＝O)(O-)2的形式)，或磷酸盐(诸如，例如本文以上描述的碱加成盐)的形式。因此，如果式(I)的化合物中的R2和/或R3是-OH(即羟基)，那么对应的前体药物可以是如下的式(I)的化合物：其中是R2的羟基(如果适用的话)和/或是R3的羟基(如果适用的话)是磷酸酯(即-O-P(＝O)(O-)2的形式)、磷酸盐或酰氧基的形式，优选是磷酸酯或磷酸盐(例如，与钠、钾或就本文以上描述的碱加成盐所提及的任何阳离子)的形式。本发明的化合物的优选的前体药物是式(I)的化合物，其中R2是-O-P(＝O)(OH)2或其盐(例如二钠盐或二钾盐)。
本文所述的化合物本身可以作为化合物施用或可配制成药物。药物/药物组合物可任选地包括一种或多种药学上可接受的赋形剂，诸如载体、稀释剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂、着色剂、颜料、稳定剂、防腐剂、抗氧化剂或溶解度增强剂(solubility enhancer)。
具体地说，药物组合物可以包括一种或多种溶解度增强剂，诸如例如，聚乙二醇，包括具有约200至约5,000Da范围内的分子量的聚乙二醇，乙二醇、丙二醇、非离子型表面活性剂、泰洛沙泊(tyloxapol)、聚山梨醇酯80、聚乙二醇-15-羟基硬脂酸酯、磷脂、卵磷脂、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、环糊精、羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、羟乙基-γ-环糊精、羟丙基-γ-环糊精、二羟丙基-β-环糊精、葡萄糖基-α-环糊精、葡萄糖基-β-环糊精、二葡萄糖基-β-环糊精、麦芽糖基-α-环糊精、麦芽糖基-β-环糊精、麦芽糖基-γ-环糊精、麦芽三糖基-β-环糊精、麦芽三糖基-γ-环糊精、二麦芽糖基-β-环糊精、甲基-β-环糊精、羧基烷基硫醚、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、乙酸乙烯酯共聚物、乙烯基吡咯烷酮、十二烷基硫酸钠、琥珀酸二辛酯磺酸钠、或其任何组合。
药物组合物可通过本领域技术人员已知的技术配制，诸如在雷明顿制药科学(Remington′s Pharmaceutical Sciences)第20版中公开的技术。药物组合物可以被配制成用于口服，肠胃外诸如肌内、静脉内、腹膜内、皮下、皮内、动脉内、直肠、鼻、局部、气溶胶或阴道施用的剂型。口服施用的剂型包括包衣片剂和非包衣片剂、软胶囊、硬胶囊、糖锭、锭剂、溶液、乳液、悬浮液、糖浆剂、酏剂、用于重构的粉末和颗粒、可分散的粉末和颗粒、含药胶(medicated gum)、咀嚼片和泡腾片。用于肠胃外施用的剂型包括溶液、乳液、悬浮液、分散液和用于重构的粉末和颗粒。乳液是用于肠胃外施用的优选剂型。用于直肠和阴道施用的剂型包括栓剂(suppository)和胚珠制剂(ovule)。用于鼻施用的剂型可经由吸入和吹入例如通过定量吸入器施用。用于局部施用的剂型包括乳膏、凝胶、软膏、油膏、贴剂和透皮递送系统。
式(I)、(II)或(III)的化合物或以上所述的包括式(I)、(II)或(III)的化合物的药物组合物可通过任何便利的施用途径向受治疗者施用，无论是全身/外周性的或在期望的作用位点施用，包括但不限于以下的一种或多种：口服(例如，作为药片、胶囊或作为可摄取的溶液)、局部(例如，透皮、鼻内、眼部、含服和舌下)、肠胃外(例如，使用注射技术或输注技术，且包括，例如，通过注射，例如皮下、皮内、肌内、静脉内、动脉内、心内、鞘内、脊柱内、囊内、囊下、框内、腹膜内、气管内、表皮下、关节内、蛛网膜下或胸骨内，通过例如植入长效药剂(depot)(例如皮下或肌内)的注射)、肺(例如，通过使用例如气溶胶例如通过口或鼻的吸入或吹入治疗)、胃肠、子宫内、眼内、皮下、眼部(包括玻璃体内或前房内(intracameral))、直肠和阴道。特别地，化合物或药物组合物可口服或通过吸入施用。特别优选的是本发明的化合物通过肺施用尤其通过以例如本文以下更详细描述的干粉制剂形式吸入而施用。
如果化合物或药物组合物被肠胃外施用，那么此类施用的实例包括以下的一种或多种：静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内或皮下施用化合物药物组合物和/或通过使用输注技术。对于肠胃外施用，化合物最好以无菌水溶液形式使用，无菌水溶液可包含其他物质例如足够的盐或葡萄糖以使溶液与血液等渗。水溶液应被适宜地缓冲(优选到3至9的pH)，如果必要的话。在无菌条件下制备适宜的肠胃外制剂容易通过本领域熟练技术人员熟知的标准制药技术实现。
化合物或药物组合物还可以以片剂、胶囊、胚珠制剂、酏剂、溶液或悬浮液(它们可包含调味剂或着色剂)口服施用，用于速释、延迟释放、缓释、持续释放、脉冲释放或控释的应用。
片剂可包含赋形剂诸如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙和甘氨酸，崩解剂诸如淀粉(优选玉米淀粉、马铃薯淀粉或木薯淀粉)、羟基乙酸淀粉钠、交联羧甲纤维素钠和某些复合硅酸盐，以及成粒粘合剂(granulation binder)诸如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。另外，可包括润滑剂诸如硬脂酸镁、硬脂酸、山嵛酸甘油酯和滑石。相似类型的固体成分还可以用作明胶胶囊中的填充剂。这方面优选的赋形剂包括乳糖(lactose)、淀粉、纤维素、乳糖(miik sugar)或高分子量聚乙二醇。对于含水悬浮液和/或酏剂，该剂可与各种甜味剂或调味剂、着色物质或染料、与乳化剂和/或悬浮剂，并与稀释剂诸如水、乙醇、丙二醇和甘油、以及它们的组合合并。
可选地，化合物或药物组合物可以以栓剂或阴道栓的形式施用，或者它可以以凝胶、水凝胶、洗液、溶液、乳膏、软膏或撒粉的形式局部施用。本发明的化合物还可以经皮(dermally)或透皮(transdermally)施用，例如，通过使用皮肤贴剂。
化合物或药物组合物还可以通过肺途径、直肠途径或眼部途径施用。对于眼用，可将它们配制为在等渗的pH调节的无菌盐水中的微粒化悬浮液或优选地配制为在等渗的pH调节的无菌盐水中的任选地与防腐剂诸如苯扎氯铵联合的溶液。可选地，可将它们配制在软膏诸如凡士林中。
此外考虑制备用于肺施用的本发明的化合物的干粉制剂。本发明的化合物的干粉制剂可使用任何适宜的干粉吸入器(DPI)递送，即利用患者的吸入呼吸作为载体运输干粉到肺的吸入器装置。
对于局部应用到皮肤，化合物或药物组合物可配制为包含悬浮或溶解在例如与以下的一种或多种的混合物中的活性化合物的适宜的软膏：矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、乳化蜡和水。可选地，可将它们配制为悬浮或溶解在例如以下的一种或多种的混合物中的适宜的洗液或乳膏：矿物油、山梨醇单硬脂酸酯、聚乙二醇、液体石蜡、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。
通常，医师将决定对个体受治疗者最适宜的实际剂量。对于任何特定的个体受治疗者的具体剂量水平和给药频率可以变化且将取决于多种因素，包括采用的特定化合物的活性、代谢稳定性和该化合物的作用时长、年龄、体重、一般健康、性别、饮食、施用方式和时间、排泄率、药物联合、特定病症的严重度以及经历治疗的个体受治疗者。
施用给人(约70kg体重)的包括式(I)、(II)或(III)的化合物的本发明的化合物的提出的但非限制的剂量可以是每单位剂量0.1μg到10g，优选0.1mg到1g，以及更优选约200mg或更多(例如200到300mg或200到500mg)的活性成分。单位剂量可施用例如每周1到4次。该剂量将取决于施用途径。应理解可能有必要根据患者/受治疗者的年龄和体重以及待治疗的病症的严重度对剂量做出常规改变。准确的剂量和施用途径将最终由护理医师或兽医师的判断。
在一个实施方案中，根据本发明的化合物可与其他治疗剂联合使用。当化合物与对同种疾病有活性的第二治疗剂联合使用时，每种化合物的剂量可能不同于当该化合物单独使用时的剂量。本发明的化合物与其他药物的联合可包括施用该药物与本发明的化合物。这种施用可包括同时/伴随施用。然而，顺序/分开施用也被考虑。
优选地，有待与本发明的化合物联合施用的第二治疗剂是抗癌药物。有待与本发明的化合物联合施用的抗癌药物可以是：肿瘤血管发生抑制剂(例如，蛋白酶抑制剂、表皮生长因子受体激酶抑制剂或血管内皮生长因子受体激酶抑制剂)；细胞毒性药物(例如，抗代谢药，诸如嘌呤和嘧啶类似物抗代谢药)；抗有丝分裂剂(例如，微管稳定药物或抗有丝分裂生物碱)；铂配位化合物；抗肿瘤抗生素；烷化剂(例如，氮芥或亚硝基脲)；内分泌剂(例如，肾上腺皮质类固醇、雄激素、抗雄激素、雌激素、抗雌激素、芳香酶抑制剂、促性腺激素释放激素激动剂、或生长抑素类似物)；或靶向被过表达和/或以其他方式参与在肿瘤细胞中失调的特定代谢途径的酶或受体的化合物(例如，ATP和GTP磷酸二酯酶抑制剂、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂、蛋白激酶抑制剂(诸如丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸激酶抑制剂(例如Abelson蛋白酪氨酸激酶))和多种生长因子、其受体及其激酶抑制剂(诸如表皮生长因子受体激酶抑制剂、血管内皮生长因子受体激酶抑制剂、成纤维细胞生长因子抑制剂、胰岛素样生长因子受体抑制剂和血小板衍生的生长因子受体激酶抑制剂))；甲硫氨酸；氨基肽酶抑制剂；蛋白酶体抑制剂；环氧合酶抑制剂(例如，环氧合酶-1或环氧合酶-2抑制剂)；或拓扑异构酶抑制剂(例如，拓扑异构酶I抑制剂或拓扑异构酶II抑制剂)。
可用作与本发明的化合物联合的抗癌药物的烷化剂可以是例如氮芥(诸如环磷酰胺、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)(恩比兴)、乌拉莫司汀、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺、苯达莫司汀、或曲磷胺)、亚硝基脲(诸如卡莫司汀、链佐星、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、泼尼莫司汀、雷莫司汀、或司莫司汀)、烷基磺酸盐(诸如白消安、甘露舒凡、或曲奥舒凡)、氮丙啶(诸如六甲基嘧胺(六甲蜜胺)、曲他胺(triethylenemelamine)、ThioTEPA(N，N′N′-三亚乙基硫化磷酰胺)、卡波醌、或三亚胺醌)、肼(诸如丙卡巴肼)、三氮烯(诸如达卡巴嗪)、或咪唑并四嗪(诸如替莫唑胺)。
可用作与本发明的化合物联合的抗癌药物的铂配位化合物可以是例如顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂、沙铂、或四硝酸三铂。
可用作与本发明的化合物联合的抗癌药物的细胞毒性药物可以是例如抗代谢药，包括叶酸类似物抗代谢药(诸如氨基蝶呤、甲氨蝶呤、培美曲塞、或雷替曲塞)，嘌呤类似物抗代谢药(诸如克拉屈滨、氯苯吩嗪、氟达拉滨、6-巯基嘌呤(包括其前体药物形式硫唑嘌呤)、喷司他丁、或6-硫鸟嘌呤)，以及嘧啶类似物抗代谢药(诸如阿糖胞苷、地西他滨、5-氟尿嘧啶(包括其前体药物形式卡培他滨和替加氟)、氟尿苷、吉西他滨、依诺他滨、或沙帕他滨(sapacitabine))。
可用作与本发明的化合物联合的抗癌药物的抗有丝分裂剂可以是例如紫杉烷(诸如多西他赛、拉罗他赛(larotaxel)、奥他赛(ortataxel)、紫杉醇/泰素、或替司他赛(tesetaxel))、长春花属生物碱(诸如长春碱、长春新碱、长春氟宁、长春地辛、或长春瑞滨)、埃坡霉素(诸如埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、埃坡霉素E、或埃坡霉素F)或埃坡霉素B类似物(诸如伊沙匹隆/氮杂埃坡霉素B)。
可用作与本发明的化合物联合的抗癌药物的抗肿瘤抗生素可以是例如蒽环类抗生素(诸如阿柔比星、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、氨柔比星、吡柔比星、戊柔比星、或佐柔比星)，蒽二酮(诸如米托蒽醌、或匹杉琼(pixantrone))或分离自链霉菌属(Streptomyces)的抗肿瘤抗生素(诸如放线菌素(包括放线菌素D)、博来霉素、丝裂霉素(包括丝裂霉素C)、或光辉霉素)。
可用作与本发明的化合物联合的抗癌药物的酪氨酸激酶抑制剂可以是例如阿西替尼、伯舒替尼、西地尼布(cediranib)、达沙替尼(dasatinib)、厄罗替尼(erlotinib)、吉非替尼、伊马替尼、拉帕替尼、来他替尼、尼罗替尼、司马沙尼(semaxanib)、索拉非尼、舒尼替尼(sunitinib)、或凡德他尼。
可用作与本发明的化合物联合的抗癌药物的拓扑异构酶抑制剂可以是例如拓扑异构酶I抑制剂(诸如伊立替康、托泊替康、喜树碱、贝洛替康(belotecan)、卢比替康、或片螺素D)或拓扑异构酶II抑制剂(诸如安吖啶、依托泊苷、磷酸依托泊苷、替尼泊苷或多柔比星)。
另外的抗癌药物可以与本发明的化合物联合使用。该抗癌药物可包括生物或化学分子，像TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)、他莫昔芬、安吖啶、贝沙罗汀、雌莫司汀、伊罗夫文、曲贝替定(trabectedin)、西妥昔单抗、帕尼单抗、托西莫单抗、阿仑单抗、贝伐单抗、依决洛单抗、吉妥珠单抗、阿伏西地(alvocidib)、seliciclib、氨基乙酰丙酸、氨基乙酰丙酸甲酯、乙丙昔罗、卜吩姆钠、他拉泊芬、替莫泊芬、维替泊芬、阿利维甲酸凝胶(alitretinoin)、维甲酸、阿那格雷、三氧化砷、阿曲生坦、硼替佐米(bortezomib)、卡莫氟、塞来考昔、秋水仙胺、伊利司莫(elesclomol)、依沙芦星、依托格鲁、氯尼达明、硫蒽酮、马索罗酚、二溴甘露醇、米托胍腙、米托坦、奥利默森(oblimersen)、omacetaxine、sitimagene、ceradenovec、替加氟、睾内酯、噻唑呋林、替吡法尼(tipifarnib)、和伏立诺他。
同样，针对参与增殖性疾病的癌症或肿瘤标志物/因子/细胞因子的生物药物像抗体、抗体片段、抗体构建体(例如单链构建体)和/或修饰的抗体(像CDR移植抗体、人源化抗体、“完全人源化”抗体等等)可与本发明的化合物一起用于联合治疗(co-therapy)方法。此类生物分子的实例是抗-HER2抗体(例如曲妥单抗、
Figure BDA00002701598500211
)、抗-CD20抗体(例如利妥昔单抗、
Figure BDA00002701598500212
)、抗-CD19/CD3构建体(参见例如EP-A-1071 752)和抗-TNF抗体(参见例如Taylor等人，Antibody therapy forrheumatoid arthritis，Curr Opin Pharmacol，2003，3(3)，323-328)。在联合治疗方法中与本发明的化合物一起使用的另外的抗体、抗体片段、抗体构建体和/或修饰的抗体可见于：Taylor等人，Antibody therapy for rheumatoidarthritis，Curr Opin Pharmacol，2003，3(3)，323-328；或Roxana等人，Maedica，2006，1(1)，63-65。
可便利地提供以上提及的联合，用于以药物制剂的形式使用。此类联合的单个组分可通过任何便利的途径在分开或合并的药物制剂中被顺序或同时/伴随施用。当顺序施用时，本化合物或第二治疗剂可被首先施用。当同时施用时，这种联合可在同一或不同的药物组合物中施用。当合并在同一制剂中时，应理解两种化合物必须是稳定的且彼此相容以及与制剂中的其他组分相容。当分开配制时，它们可便利地以此类化合物在本领域中已知的方式被提供在任何便利的制剂中。
在另一实施方案中，本发明的化合物与物理治疗诸如放射治疗联合施用。放射治疗可在施用化合物之前、之后或与其同时开始。例如，放射治疗可在施用化合物之后1到10分钟、1到10小时或24到72小时开始。然而，这些时间段不应被解释为限制。受治疗者被暴露于辐射，优选γ辐射，由此辐射可以单剂量或多剂量提供，经若干小时、天和/或周施用。γ辐射可根据使用标准剂量和方案的标准放射治疗方案递送。不受理论限制，本发明的化合物可用于使细胞尤其是不期望的增殖性/过度增殖性细胞像癌细胞或肿瘤细胞对这种物理治疗例如放射治疗更敏感。
因此，本发明涉及用于治疗或预防癌症的式(I)、(II)或(III)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物或前体药物，或包含与药学上可接受的赋形剂联合的上述实体中的任何一种的药物组合物，由此该化合物或药物组合物将与抗增殖药物、抗癌药物、细胞稳定药、细胞毒药物和/或放射治疗联合施用。
此外，特别考虑使用如本文以上所述的联合治疗来治疗或预防多药耐药癌症，包括以上所述的具体的多药耐药癌症。
受治疗者或患者诸如需要治疗或预防的受治疗者可以是动物、脊椎动物、哺乳动物、啮齿动物(例如，豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠类(例如小鼠)、犬科动物(例如狗)、猫科动物(例如猫)、马类(例如马)、灵长类、猿猴类(simian)(例如猴或猿)、猴类(例如狨猴、狒狒)、猿(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)、或人。术语“动物”、“哺乳动物”等等的含义是本领域熟知的并且可以例如从Wehner und Gehring(1995；Thieme Verlag)推出。在本发明的背景下，特别考虑治疗经济学上、农艺学上或科学上重要的动物。科学上重要的生物包括但不限于小鼠、大鼠、兔、果蝇像黑腹果蝇(Drosophilamelagonaster)以及线虫像秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)。农艺学上重要的动物的非限制性实例是绵羊、牛和猪，而例如猫和狗可被认为是经济学上重要的动物。优选地，受治疗者/患者是哺乳动物。更优选地，受治疗者/患者是人。
例如在癌症的治疗的情况下，如本文所用的术语“疾患或疾病的治疗”是本领域熟知的。“疾患或疾病的治疗”暗示已在患者/受治疗者中诊断出疾患或疾病。怀疑患有疾患或疾病的患者/受治疗者通常显示技术人员可容易地归于具体病理学病症(即作出疾患或疾病的诊断)的具体临床和/或病理学症状。
“疾患或疾病的治疗”可以例如导致疾患或疾病进程的停止(例如，无症状恶化)或疾患或疾病进程的延缓(在进程的停止只是暂时性质的情况)。“疾患或疾病的治疗”还可以导致患有该疾患或疾病的受治疗者/患者的部分响应(例如，症状的恶化)或完全响应(例如，症状的消失)。疾患或疾病的“恶化”可以例如导致该疾患或疾病的进程停止或该疾患或疾病的进程延缓。这种部分或完全响应之后可以是复发。应理解受治疗者/患者可经历对治疗的宽范围的响应(例如，如本文以上所述的示例性的响应)。
疾患或疾病的治疗尤其可以包括治愈性治疗(优选引起完全响应且最终引起疾患或疾病的治愈)和姑息治疗(包括症状缓解)。
同样，例如在癌症的预防的情况下，如本文所用的术语“疾患或疾病的预防”是本领域熟知的。例如，怀疑容易患本文所定义的疾患或疾病的患者/受治疗者尤其可以受益于该疾患或疾病的预防。受治疗者/患者可具有对疾患或疾病的敏感性或易感性，包括但不限于遗传素因。这种易感性可通过标准测定使用例如遗传标记或表型指示物来确定。应理解有待根据本发明预防的疾患或疾病在患者/受治疗者中没有被诊断或不能被诊断(例如，患者/受治疗者没有显示任何临床症状或病理学症状)。因此，术语“预防”包括在任何临床症状和/或病理学症状被护理医师诊断或确定或者能够被诊断或确定之前使用本发明的化合物。
在本说明书中，引用了许多文件，包括专利申请和制造商手册。尽管不认为这些文件的公开与本发明的可专利性相关，但仍通过引用将其整体并入本文。更具体地说，将所有提及的文件通过引用并入达到就如将每篇单独的文件具体地且单个地指出是通过引用并入的程度。
还通过以下示例性图阐释本发明。附图显示：
图1：5b(新鲜制备的溶液vs储存一个月的溶液)对微管蛋白聚合的抑制。化合物5b有效地抑制微管蛋白的聚合。随时间没有观察到活性损失。(测试：微管蛋白聚合测定)。
图2：5b(新鲜制备的溶液vs储存一个月的溶液)的细胞毒活性。效力的持久性证明了5b当溶解时的化学稳定性(测试：SRB细胞毒性测定)。
图3：5b与顺铂的体外细胞毒性比较(A)或5b、6b与顺铂的体外细胞毒性比较(B)。用5b或6b治疗导致1411HP细胞多药耐药性的破坏(测试：SRB细胞毒性测定)。
图4：化合物5b和6b在多药耐药生殖细胞肿瘤细胞系1411HP的小鼠异种移植物中的体内抗肿瘤活性。显示了在测试化合物的单剂量(A)和双剂量(B)应用后的肿瘤响应以及对重复应用(C)的肿瘤响应。箭头指示测试化合物的施用。
图5：5b的血管破坏作用。选择性影响肿瘤血管的显著的血管破坏作用依据导致整个肿瘤红色-蓝色到棕色变色的出血是明显的(A：治疗前；B：治疗开始后24小时)(测试：在裸小鼠模型中的皮下肿瘤异种移植物；将小鼠麻醉以成像)。
图6：各种浓度(■：100μM；▲：1μM；
Figure BDA00002701598500241
0.01μM；◆：0.001μM)的参考化合物25f和根据本发明的化合物5b、6b、8a和8e或5c、5d、6c、6d、8b、8c和8d(结构示于实施例2或4)在人518A2黑色素瘤、HL-60白血病、HT-29结肠癌、KB-V1/Vbl宫颈癌和MCF-7/Topo乳腺癌的细胞中(A)或在人518A2黑色素瘤、HL-60白血病和HT-29结肠腺癌的细胞中(B)孵育24-72小时后产生的细胞生长抑制(x轴)。Y轴显示由MTT测定确定的活力细胞相对于未治疗的对照(1)的数目。
图7：各种浓度(■：100μM；▲：1μM；●：0.01μM；◆：0.001μM)的考布他汀A-4在人HT-29结肠腺癌细胞中孵育24-72小时后产生的细胞生长抑制(x轴)。Y轴显示由MTT测定确定的活力细胞相对于未治疗的对照的数目。
图8：在TUNEL测定中测试的HL-60细胞在与10μM的化合物5b、6b或8a孵育16小时后的显微镜图像。亮视野图片(左)显示在焦点上的所有细胞，绿色荧光通道的图片(右)只显示表现为亮圆点的凋亡细胞。
图9：显示在添加测试化合物CA-4或5b后立即(左)、一天后(中)以及三天后(右)具有周围血管的鸡胚。顶排显示阴性对照。图片代表至少两次独立的试验(run)。
图10：化合物6b在多药耐药生殖细胞肿瘤细胞系1411HP的小鼠异种移植物中体内抗肿瘤活性。显示了在双剂量应用后的肿瘤响应。箭头指示测试化合物的施用。
图11：化合物5b、6b、5f和6f在A2780在卵巢癌异种移植肿瘤(A)和1411HP生殖细胞肿瘤异种移植物(B)中的血管破坏作用。选择性影响肿瘤血管的显著的血管破坏作用依据导致整个肿瘤红色-蓝色到棕色变色的出血是明显的(第0天：治疗前；第1天：治疗开始后24小时)(测试：在裸小鼠模型中的皮下肿瘤异种移植物；将小鼠麻醉以成像)。
图12：在口服施用6b后在1411HP生殖细胞肿瘤异种移植物中的血管破坏作用。选择性影响肿瘤血管的显著的血管破坏作用依据导致整个肿瘤红色-蓝色到棕色变色的出血是明显的(第0天：治疗前；第1天：治疗开始后24小时)(测试：在裸小鼠模型中的皮下肿瘤异种移植物；将小鼠麻醉以成像)。
图13：化合物5b、6b、5f和6f与25f相比在H12.1生殖细胞肿瘤(A)、1411HP生殖细胞肿瘤(B)、A2780卵巢癌(C)、HT29结肠癌(D)、DLD1结肠癌(E)和HCT8结肠癌(F)细胞系中的体外细胞毒性的比较(测试：SRB细胞毒性测定)。
图14：在用7.72ng/mL浓度的化合物8a(A)、6b(B)或5b(C)或对照(甲醇)(D)处理后HUVEC细胞的管形成测定(Tube formation assay)。
图15：化合物6b(表示为“(Brimamin(Schobert)”)和化合物8a(表示为“Amoxamin 2(Schobert)”)在PtK-2细胞中的高内涵分析(High-contentanalysis)。
现在通过参考以下实施例描述本发明，以下实施例仅为示例性的且不得解释为对本发明范围的限制。
实施例
一般注释
熔点在GALLENKAMP装置上记录且是未校正的。红外光谱在具有ATR采样元件(samμLing unit)的PERKIN-ELMER Spectrum One FT-IR分光光度计上记录。核磁共振(MR)谱BRUKER Avance 300光谱仪上在如所示的条件下记录。以由四甲基硅烷作为1H和13C的内标的百万分之一(δ)低场给出化学位移。使用VARIAN MAT 311A(EI)记录质谱。用PERKINELMER 2400CHN元素分析仪进行微量分析。借助元素分析所有的测试化合物＞95％纯。色谱使用MERCK硅胶60(230-400目)。所有的起始化合物均从ALDRICH购买且未经进一步纯化而使用。
实施例1：1-甲基-5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-4-(3-氯-4，5-二甲氧基苯基)-咪唑二(盐酸盐)(5b×2HCl)的合成
1)N-[(甲苯-4-磺酰基)-(3-氯-4，5-二甲氧基苯基)甲基]甲酰胺3a
用甲酰胺(10mL)处理5-氯藜芦醛(5.7g，23.4mmol)、对甲苯亚磺酸(3.0g，19.3mmol)和樟脑磺酸(110mg，0.47mmol)。在加热到65℃后反应混合物变为溶液且两个小时后产物开始沉淀。在搅拌16小时后过滤沉淀，用甲醇洗涤并且在真空中干燥。
产量：4.57g(11.92mmol，51％)；mp 157-158℃的无色固体；vmax(ATR)/cm-1：3190，3107，2947，1690，1593，1576，1484，1470，1423，1403，1308，1283，1250，1215，1143，1121，1078，1053，999，860，822，788，769，659，689；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ2.41(3H，s，CH3)，3.76(3H，s，O CH3)，3.79(3H，s，O CH3)，6.45(1H，d，3J10.7Hz，CH)，7.24(1H，d，4J1.9Hz，2-H)，7.30(1H，d，4J1.9Hz，6-H)，7.43(1H，d，3J8.4Hz，甲苯磺酰基-3-H/5-H)，7.72(2H，d，3J8.4Hz，甲苯磺酰基-2-H/6-H)，7.98(1H，s，HCONH)，9.74(1H，d，3J10.7Hz，NH)；13C-NMR(75.5MHz，DMSO-d6)：δ21.1(CH3)，56.3(5-OCH3)，60.3(4-OCH3)，69.5(CH)，113.5(C-6)，122.4(C-2)，126.7(C-3)，127.1(C-1)，129.2(甲苯磺酰基-C-3/C-5)，129.6(甲苯磺酰基-C-2/C-6)，133.2(甲苯磺酰基-C-1)，144.9(C-4)，145.4(甲苯磺酰基-C-4)，153.1(C-5)，160.2(CO)；m/z(％)382(4)，278(6)，227(89)，192(76)，156(57)，113(55)，91(100)，77(67)，63(92)。
2)3-氯-4，5-二甲氧基苯基(甲苯磺酰基)甲基异氰化物4a
将化合物3a(4.57g，11.92mmol)悬浮在干燥二甲氧基乙烷(100mL)中并冷却到-10℃。添加POCl3(3.4mL，36.1mmol)并且将三乙胺(8.3mL，59.5mmol)在二甲氧基乙烷(10mL)中的混合物缓慢滴加到反应混合物中。在-5℃搅拌2小时后，将反应混合物倒入冰水中。用乙酸乙酯萃取水相，用饱和NaHCO3水溶液和盐酸洗涤有机相，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。在过夜冷藏(4℃)后，结晶出黄色固体，收集该黄色固体并且在真空中干燥。
产量：2.48g(6.79mmol，57％)；mp 115℃的黄色固体；vmax(ATR)/cm-1：2920，2136，1593，1577，1492，1452，1423，1325，1294，1276，1238，1199，1137，1082，1053，1002，862，826，759，705，683；1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ2.45(3H，s，CH3)，3.79(3H，s，5-OCH3)，3.87(3H，s，4-OCH3)，5.49(1H，s，CH)，6.76(1H，d，4J 2.1Hz，6-H)，6.88(1H，d，4J 2.1Hz，2-H)，7.34(2H，d，3J8.5Hz，甲苯磺酰基-3-H/5-H)，7.64(2H，d，3J 8.5Hz，甲苯磺酰基-2-H/6-H)；13C-NMR(75.5MHz，CDCl3)：δ21.7(CH3)，56.2(5-OCH3)，60.8(4-OCH3)，75.6(CH)，110.8(C-6)，122.2(C-2)，122.6(C-1)，128.6(C-3)，129.9(甲苯磺酰基-C-3/C-5)，130.0(甲苯磺酰基-C-4)，130.4(甲苯磺酰基-C-2/C-6)，146.9(甲苯磺酰基-C-1)，147.4(C-4)，153.8(C-5)，166.6(CN)；m/z(％)365(2)[M+]，278(7)，246(10)，210(100)，155(23)，91(54)，66(20)。
3)1-甲基-4-(3-氯-4，5-二甲氧基苯基)-5-(4-甲氧基-3-硝基苯基)咪唑5a
用乙酸(150μL)处理4-甲氧基-3-硝基苯甲醛(76mg，0.42mmol)和33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)在乙醇(15mL)中的混合物并回流2小时。在冷却至室温后，添加溶解在二甲氧基乙烷(10mL)中的化合物4a(153mg，0.42mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)并将该反应混合物回流另外3小时。蒸发溶剂，用乙酸乙酯稀释残余物，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。
产量：110mg(0.26mmol，62％)；黄色油状物；Rf＝0.24(乙酸乙酯/甲醇95∶5)；vmax(ATR)/cm-1：2939，1623，1600，1566，1524，1505，1483，1461，1396，1342，1325，1263，1230，1189，1167，1112，1086，1047，994，889，873，863，828，816，762，737，698，675；1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ3.44(3H，s，NCH3)，3.64(3H，s，5-OCH3)，3.75(3H，s，4-OCH3)，3.95(3H，s，4-OCH3)，6.9-7.0(2H，m，2-H，6-H)，7.15(1H，d，3J8.7Hz，5-H)，7.45(1H，dd，3J8.7Hz，4J2.2Hz，6-H)，7.50(1H，s，2-H)，7.78(1H，d，3J2.2Hz，2-H)；13C-NMR(75.5MHz，CDCl3)：δ32.1(NCH3)，55.7(5-OCH3)，56.6(4-OCH3)，60.5(4-OCH3)，109.2(C-6)，114.2(C-5)，119.7(C-2)，122.2(C-1)，126.0(C-3)，127.3(C-2)，127.9(C-5)，130.6(C-1)，136.4(C-6)，137.5(C-4)，137.8(C-2)，139.7(C-3)，144.0(C-4)，152.9(C-4)，153.4(C-5)；m/z(％)407(42)，406(46)，405(87)[M+]，404(77)，403(100)[M+]，391(23)，390(71)，389(62)，388(87)，341(58)，313(58)，206(33)，164(26)。
4)1-甲基-5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-4-(3-氯-4，5-二甲氧基苯基)-咪唑-二(盐酸盐)5b×2HCl
将化合物5a(109mg，0.27mmol)溶解在四氢呋喃(7.5mL)中。加入Zn粉(107mg，1.36mmol)接着加入浓HCl(230μL)在四氢呋喃(1mL)中的混合物。在室温下搅拌15min后将反应混合物倒入水中并用NaHCO3水溶液处理以采用pH 8。用乙酸乙酯萃取水相并经Na2SO4干燥有机相，过滤并在真空中浓缩滤液。通过柱色谱(硅胶60，5％甲醇/乙酸乙酯，Rf＝0.66)纯化由此获得的残余物，给出粗制5b。将这种粗产物溶解在二氯甲烷(5mL)中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在搅拌15min后除去挥发物并且将油状残余物从乙醇/正己烷混合物中重结晶以留下5b的二(盐酸盐)。
产量：42mg(0.095mmol，40％)；mp 80-183℃的无色固体；UV(MeOH)λmax(ε)255(14940)；vmax(ATR)/cm-1：3009，2781，2578，1635，1552，1517，1497，1445，1409，1304，1271，1147，1113，1047，1025，998，830，762，739，721；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ3.63(3H，s，NMe)，3.69(3H，s，5-OMe)，3.75(3H，s，4-OMe)，3.92(3H，s，4-OMe)，7.08(1H，d，4J2.1Hz，6-H)，7.16(1H，d，4J2.1Hz，2-H)，9.36(1H，s，2-H)；13C-NMR(75.5MHz，DMSO-d6)：δ33.9(NMe)，56.1(5-OMe)，56.2(4-OMe)，60.4(4-OMe)，110.7(C-6)，112.4(C-5)，117.6(C-1)，119.6(C-2)，123.6(C-3)，127.3(C-3)，127.6(C-5)，129.7(C-1)，135.7(C-2)，145.0(C-4)，153.5(C-5)；m/z(％)375(20)[M+]，374(15)，373(54)[M+]，358(25)，296(15)，252(25)，237(16)，70(14)，61(23)，43(100)。
实施例2：根据本发明的另外的化合物的合成
1)N-[(甲苯-4-磺酰基)-(3-溴-4，5-二甲氧基苯基)甲基]甲酰胺3b
与3a的合成类似，从5-溴藜芦醛(5.67g，23.14mmol)、对甲苯亚磺酸(3g，19.29mmol)、樟脑磺酸(110mg，0.47mmol)和甲酰胺(10mL)获得化合物3b(4.78g，10.81mmol，56％)；mp 162-163℃的无色固体；vmax(ATR)/cm-1 3197，3104，2945，1688，1595，1569，1490，1470，1422，1403，1308，1301，1290，1279，1250，1229，1207，1144，1121，1078，1049，998，832，769，705，688；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.41(3H，s)，3.82(6H，s)，6.17(1H，s)，6.99(1H，d，J＝2.1Hz)，7.17(1H，d，J＝2.1Hz)，7.31(1H，d，J＝8.5Hz)，7.67(2H，d，J＝8.5Hz)，7.97(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ21.9，56.4，61.0，70.7，113.3，118.0，125.9，127.3，129.9，130.2，133.1，146.2，147.9，154.0，161.3；m/z(EI)274(28)，273(45)，272(37)，271(40)，242(27)，192(100)，156(30)，92(56)，91(55)，65(36)。
2)N-[(甲苯-4-磺酰基)-(3，4-二甲氧基-5硝基苯基)甲基]甲酰胺3c
与3a的合成类似，从5-硝基藜芦醛(4.85g，22.99mmol)、对甲苯亚磺酸(2.96g，19.03mmol)、樟脑磺酸(110mg，0.47mmol)和甲酰胺(10mL)获得化合物3c(2.63g，6.68mmol，35％)；mp 133℃的无色固体；vmax(ATR)/cm-13194，2888，1662，1539，1518，1389，1354，1319，1302，1291，1212，1271，1084，1074，1053，991，922，858，819；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.41(3H，s)，3.87(3H，s)，3.95(3H，s)，6.33(1H，d，J＝10.6Hz)，7.26(1H，d，J＝2.1Hz)，7.31(1H，d，J＝8.5Hz)，7.43(1H，d，J＝2.1Hz)，7.70(2H，d，J＝8.5Hz)，8.06(1H，s)，8.9-9.0(1H，m)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ21.7，56.5，62.0，69.9，116.4，117.2，125.8，129.4，130.1，132.3，143.9，144.5，146.1，154.1，160.3；m/z(EI)196(7)，155(9)，91(100)，65(58)。
3)3-溴-4，5-二甲氧基苯基(甲苯磺酰基)甲基异氰化物4b
将化合物3b(4.75g，10.75mmol)悬浮在干DME(100mL)中并冷却至-10℃。加入POCl3(3.1mL，33.1mol)并向该反应混合物缓慢滴加Et3N(7.5mL，53.8mmol)在DME(10mL)中的混合物。在-5℃搅拌2小时后，将反应混合物倒入冰水中。用乙酸乙酯萃取水相，用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤有机相，经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过过夜冷藏，棕色固体从残余物中结晶，收集该棕色固体并且在真空中干燥。产量：2.75g(6.71mmol，62％)；mp 109-110℃的棕色固体；vmax(ATR)/cm-1 2915，2135，1593，1569，1489，1452，1420，1325，1295，1275，1238，1199，1136，1081，1048，1003，862，826，759，705，670；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.47(3H，s)，3.81(3H，s)，3.86(3H，s)，5.46(1H，s)，6.81(1H，d，J＝2.2Hz)，7.01(1H，d，J＝2.2Hz)，7.35(2H，d，J＝8.3Hz)，7.64(2H，d，J＝8.3Hz)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ21.8，56.2，60.7，75.5，111.5，117.8，123.2，125.0，129.9，130.0，130.5，146.9，148.5，153.6，166.6；m/z(EI)256(52)，254(45)，244(78)，242(100)，200(30)，123(48)，91(31)。
4)3，4，-二甲氧基-5-硝基苯基(甲苯磺酰基)甲基异氰化物4c
将化合物3c(2.63g，6.68mmol)悬浮在干DME(100mL)中并冷却至-10℃。加入POCl3(3.78mL，40.4mol)并向该反应混合物缓慢滴加Et3N(7.5mL，66.6mmol)在DME(10mL)中的混合物。在-5℃搅拌2小时后，将反应混合物倒入冰水中。用乙酸乙酯萃取水相，用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤有机相，经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过过夜冷藏，黄色固体从残余物中结晶，收集该黄色固体并且在真空中干燥。产量：520mg(1.51mmol，23％)；mp 134℃(dec.)的黄色固体；vmax(ATR)/cm-12949，2140，1593，1538，1494，1453，1360，1337，1315，1285，1248，1184，1156，1145，1082，1065，988，921，819，784，701，667；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.48(3H，s)，3.91(3H，s)，4.00(3H，s)，5.53(1H，s)，7.12(1H，d，J＝2.2Hz)，7.18(1H，d，J＝2.2Hz)，7.38(2H，d，J＝8.4Hz)，7.67(2H，d，J＝8.4Hz)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ21.9，56.7，62.3，75.3，115.3，116.3，122.3，129.7，129.8，130.4，144.6，144.8，147.4，154.4，167.5；m/z(EI)375(6)[M+-1]，344(12)，278(23)，262(22)，221(100)，211(47)，155(32)，139(38)。
5)1-甲基-4-(3′-氯-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(3″-氟-4″-甲氧基苯基)-咪唑5c
与化合物5a的合成类似，从沸腾的乙醇(15mL)中的3-氟-4-甲氧基苯甲醛(65mg，0.42mmol)、33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)和乙酸(150μL)中制备化合物5c，给出亚胺中间体，该亚胺中间体用溶解在DME(10mL)中的化合物4a(153mg，0.42mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)处理。在后处理后，通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。产量：150mg(0.38mmol，91％)；无色胶质；Rf＝0.27(乙酸乙酯/甲醇95∶5)；vmax(ATR)/cm-12937，2837，1601，1553，1512，1487，1462，1419，1301，1067，1233，1166，1131，1046，1022，999，896，873，829，815，761，734，719，656；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.39(3H，s)，3.61(3H，s)，3.75(3H，s)，3.87(3H，s)，6.9-7.0(5H，m)，7.45(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ31.9，55.6，56.1，60.5，109.0，113.7，118.0，118.2，119.4，122.4，122.5，126.9，127.5，127.8，131.0，136.7，137.2，143.6，148.0，148.1，150.5，153.2，153.8；m/z(EI)379(15)，378(65)[M+]，377(41)，376(100)[M+]，363(26)，361(67)。
6)1-甲基[-4-(3′-氯-4′5′-二甲氧基苯基)-5-(3″-氟-4″-甲氧基苯基)-咪唑盐酸盐5c×HCl
将化合物5c(150mg，0.38mmol)溶解在DCM(5mL)中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在搅拌15min后除去溶剂并且将油状残余物从DCM/正己烷混合物中重结晶，给出5c的盐酸盐。产量：106mg(0.25mmol，66％)；mp 185-187℃的无色固体；UV(MeOH)λmax(ε)264(10380)；vmax(ATR)/cm-13387，2941，2840，2605，1623，1553，1523，1498，1464，1456，1422，1303，1272，1232，1134，1117，1048，1019，997，872，844，817，760；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.63(3H，s)，3.70(3H，s)，3.75(3H，s)，3.92(3H，s)，7.02(1H，d，J＝2.1Hz)，7.17(1H，d，J＝2.1Hz)，7.2-7.3(1H，m)，7.39(1H，t，J＝17.2Hz)，7.51(1H，dd，J＝12.0Hz，J＝2.0Hz)，9.29(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)：δ33.8，56.0，56.2，60.3，110.8，114.6，117.9，118.0，118.3，118.5，119.6，124.0，127.2，128.1，128.5，128.8，135.8，144.9，148.7，148.9，149.8，153.0，153.5。
7)1-甲基-4-(3′-氯-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(4″-N，N-二甲基氨基苯基)-咪唑5d
与化合物5a的合成类似，从沸腾的乙醇(15mL)中的4-N，N-二甲基氨基苯甲醛(63mg，0.42mmol)、33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)和乙酸(150μL)制备化合物5d，给出亚胺中间体，该亚胺中间体用溶解在DME(10mL)中的化合物4a(153mg，0.42mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)处理。在后处理后，通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。产量：140mg(0.38mmol，91％)；无色油；Rf＝0.67(乙酸乙酯/甲醇95∶5)；vmax(ATR)/cm-12935，2825，1612，1552，1516，1485，1397，1357，1316，1261，1228，1187，1165，1108，1047，1000，944，881，857，818，762，721，660；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.96(6H，s)，3.39(3H，s)，3.59(3H，s)，3.76(3H，s)，6.72(2H，d，J＝8.9Hz)，7.00(1H，d，J＝1.9Hz)，7.11(2H，d，J＝8.9Hz)，7.16(1H，d，J＝1.9Hz)，7.46(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ31.8，40.2，55.5，60.5，108.8，112.3，116.8，119.2，127.7，129.7，131.3，131.6，135.9，136.7，143.2，150.5，153.0；m/z(EI)373(36)[M+]，371(100)[M+]，356(42)，281(10)，72(19)，59(34)。
8)1-甲基-4-(3′-氯-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(4″-N，N-二甲基氨基苯基)-咪唑二(盐酸盐)5d×2HCl
将化合物5d(140mg，0.38mmol)溶解在DCM(5mL)中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在搅拌10min后蒸发溶剂并从乙醇/正己烷中结晶残余物。产量：77mg(0.17mmol，46％)；mp 189-193℃(dec)的无色固体；UV(MeOH)λmax(ε)265(20800)；vmax(ATR)/cm-1 3356，3022，2956，2835，2452，1620，1595，1551，1499，1470，1422，1319，1279，1231，1190，1160，1129，1052，1020，989，897，859，842，756，696；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.00(6H，s)，3.62(3H，s)，3.69(3H，s)，3.74(3H，s)，6.98(2H，d，J＝8.8Hz)，7.07(1H，d，J＝2.1Hz)，7.21(1H，d，J＝2.1Hz)，7.33(2H，d，J＝8.8Hz)，9.37(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)δ33.9，40.2，56.1，60.4，107.8，113.2，119.5，123.8，127.0，127.2，130.8，131.6，135.4，144.9，150.8，153.5。
9)1-甲基-4-(3′-氯-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(4″-乙氧基-3″-硝基苯基)-咪唑5e
将4-乙氧基-3-硝基苯甲醛(82mg，0.42mmol)和33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)在乙醇(15mL)中的混合物用AcOH(150μL，2.63mmol)处理并回流2小时。在冷却至室温后，添加4a(153mg，0.42mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)并且将该反应混合物回流5小时。蒸发溶剂，残余物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过柱色谱(硅胶60，乙酸乙酯/甲醇9∶1)纯化残余物，给出为橙色油的产物。产量：170mg(0.34mmol，81％)；vmax(ATR)/cm-1：2938，1622，1600，1553，1527，1506，1484，1353，1286，1263，1110，1045，998，870，829，817，762，739，656，635；1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.43(3H，t，3J7.0Hz，Me)，3.44(3H，s，NMe)，3.63(3H，s，4’-OMe)，3.75(3H，s，5’-OMe)，4.18(2H，q，3J7.0Hz，OCH2)，6.9-7.0(2H，m，2’-H，6’-H)，7.12(1H，d，3J8.7Hz，5”-H)，7.41(1H，dd，3J8.7Hz，4J2.2Hz，6”-H)，7.49(1H，s，2-H)，7.75(1H，d，4J 2.2Hz，2”-H)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)：δ14.3(Me)，32.1(NMe)，55.7(5’-OMe)，60.5(4’-OMe)，65.5(OCH2)，109.1(C-6’)，115.0(C-5”)，119.6(C-2’)，121.9(C-1”)，126.1(C-5)，127.2(C-6”)，127.9(C-3’)，130.6(C-1’)，136.2(C-2”)，137.4(C-4)，137.8(C-2)，139.9(C-3”)，143.9(C-4’)，152.2(C-5’)，153.3(C-4”)；m/z(％)419(36)[M+]，417(100)[M+]，402(53)。
10)1-甲基-5-(3″-氨基-4″-乙氧基苯基)-4-(3′-氯-4′，5′-二甲氧基苯基)-咪唑5f×2HCl
将化合物5e(140mg，0.34mmol)溶解在THF(7.5mL)中。加入Zn粉(110mg，1.68mmol)接着加入浓HCl(243μL)在THF(1mL)中的混合物。在室温下搅拌15min后将反应混合物倒入水中并用NaHCO3水溶液碱化至约pH 8。用乙酸乙酯萃取水相并经Na2SO4干燥有机相，过滤并在真空中浓缩滤液。通过柱色谱(硅胶60，10％甲醇/乙酸乙酯，Rf＝0.63)纯化残余物，给出苯胺中间体。将这种化合物溶解在DCM(5mL)中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在搅拌15min后除去溶剂并且将残余物从DCM/正己烷混合物中重结晶。产量：97mg(0.21mmol，62％)；m.p.＞150℃(dec)的无色固体；vmax(ATR)/cm-1：3392，2976，2833，2538，1631，1550，1514，1495，1466，1396，1302，1268，1237，1142，1115，1044，996，850，816，762，722；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.40(3H，t，3J6.9Hz，Me)，3.63(3H，s，NMe)，3.70(3H，s，4’-OMe)，3.75(3H，s，5’-OMe)，4.21(2H，q，3J6.9Hz，OCH2)，7.07(1H，d，4J2.1Hz，6’-H)，7.19(1H，d，4J2.1Hz，2’-H)，7.3-7.4(2H，m，5”-H，6”H)，7.45(1H，s，2”-H)，9.41(1H，s，2-H)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)：δ14.4(Me)，34.0(NMe)，56.2(5’-OMe)，60.4(4’-OMe)，64.6(OCH2)，110.8(C-6’)，113.7(C-5”)，117.5(C-1”)，119.6(C-2’)，123.5(C-5)，127.3(C-3’)，127.7(C-1’)，129.3(C-4)，135.8(C-2)，145.0(C-4’)，151.7(C-5’)，153.5(C-4”)；m/z(％)388(35)[M+]，386(100)[M+]，371(36)，36(98)。
11)1-甲基-4-(3′-氯-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(3″-氟-4″-乙氧基苯基)-咪唑5g×HCl
将3-氟-4-乙氧基苯甲醛(124mg，0.74mmol)和33％MeNH2/乙醇(460μL，3.76mmol)在乙醇(15mL)中的混合物用AcOH(260μL，4.63mmol)处理并回流2小时。在冷却至室温后，添加4a(270mg，0.74mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)并且将该反应混合物回流5小时。蒸发溶剂，用乙酸乙酯稀释残余物，用水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过柱色谱(硅胶60，乙酸乙酯/甲醇95∶5)纯化残余物，给出为无色油的咪唑。将这种油溶解在DCM(5mL)中并且用二噁烷(1mL)中的3M HCl处理。在搅拌5min后蒸发溶剂，并且从DCM/正己烷中结晶残余物。产量：210mg(0.49mmol，66％)，无色固体；vmax(ATR)/cm-1：3391，3166，2946，2841，2727，1627，1554，1523，1499，1477，1423，1395，1302，1269，1230，1193，1136，1117，1050，998，888，844，814，778，753；1H NMR(300MHz，丙酮-d6)：δ1.44(3H，t，3J7.0Hz)，3.75(3H，s)，3.77(3H，s)，3.88(3H，s)，4.25(2H，q，3J7.0Hz)，7.01(1H，d，4J2.1Hz)，7.35(1H，t，3JHF18.0Hz)，7.56(1H，dd，3J11.7Hz，4J1.9Hz)，9.71(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，丙酮-d6)：δ15.0，34.9，57.1，60.8，65.7，111.8，113.8，116.3，119.2，119.3，119.6，119.9，120.6，122.4，124.4，124.5，128.6，129.2，130.1，134.6，136.6，146.4，149.8，149.9，151.7，154.8，155.0；m/z(％)392(37)[M+]，390(100)[M+]，377(21)，375(65)。
12)1-甲基-4-(3′-氯-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3″-氯吲哚-5″-基)-咪唑5i
与5a的合成类似，从沸腾的乙醇(15mL)中的N-甲基-3-氯吲哚-5-甲醛的亚胺(81mg，0.42mmol)、33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)和乙酸(150μL)获得化合物5i，化合物5i用4a(153mg，0.42mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)处理。产量：160mg(0.39mmol，93％)；无色油；Rf＝0.62(乙酸乙酯/甲醇95∶5)；vmax(ATR)/cm-1：2937，2830，1600，1565，1504，1476，1463，1397，1314，1261，1240，1166，1109，1047，999，972，907，883，856，831，803，727，700，686，656；1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ3.41(3H，s，1-NMe)，3.52(3H，s，5’-OMe)，3.75(6H，s，1”-NMe，4’-OMe)，7.02(1H，d，4J2.0Hz，6’-H)，7.06(1H，s，2”-H)，7.09(1H，d，4J2.0Hz，2’-H)，7.14(1H，dd，3J8.5Hz，4J1.5Hz，6”-H)，7.35(1H，d，3J8.5Hz，7”-H)，7.52(1H，s，2-H)，7.57(1H，d，4J1.5Hz，4”-H)；13C-NMR(75.5MHz，CDCl3)：δ32.0(1-NMe)，33.0(1”-NMe)，55.6(5”-OMe)，60.5(4’-OMe)，104.6(C-3”)，109.0(C-6’)，110.3(C-7”)，119.4(C-2’)，120.5(C-4”)，121.5(C-5”)，125.1(C-6”)，126.0，126.3(C-2”)，127.7(C-3’)，129.8(C-5)，131.5(C-1’)，135.7(C-7a”)，136.3(C-4)，136.9(C-2)，143.5(C-4’)，153.1(C-5’)；m/z(EI)417(72)[M+]，415(100)[M+]，402(43)，400(55)。
13)1-甲基-4-(3′-氯-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3″-氯吲哚-5″-基)-咪唑-盐酸盐5i×HCl
将化合物5i(160mg，0.39mmol)溶解在DCM(5mL)中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在室温下搅拌10min后在真空中蒸发溶剂并从DCM/正己烷中结晶残余物。产量：98mg(0.20mmol，51％)；无色固体；mp.198℃；UV(MeOH)λmax(ε)230(30800)；vmax(ATR)/cm-1：3392，2941，2845，2602，1622，1565，1542，1493，1464，1456，1318，1239，1115，1046，996，971，871，852，803；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ3.61(6H，s，1-NMe，5’-OMe)，3.72(3H，s，4’-OMe)，3.86(3H，s，1”-NMe)，6.99(1H，d，4J2.1Hz，6’-H)，7.20(1H，d，4J2.1Hz，2’-H)，7.34(1H，dd，3J9.4Hz，4J1.6Hz，6”-H)，7.7-7.8(3H，m，2”-H，4”-H，7”-H)，9.32(1H，s，2-H)；13C-NMR(75.5MHz，DMSO-d6)：δ33.0(1-NMe)，33.9(1”-NMe)，56.0(5”-OMe)，60.3(4’-OMe)，102.7(C-3”)，110.8(C-6’)，111.8(C-7”)，117.0(C-5”)，119.5(C-2’)，120.4(C-4”)，124.1(C-3a”)，124.5(C-6”)，125.1(C-7a”)，127.2(C-3’)，127.9(C-5)，128.3(C-2”)，130.9(C-1’)，135.6(C-2)，136.0(C-4)，144.8(C-4’)，153.4(C-5’)；m/z(EI)417(100)[M+-2HCl]，415(68)[M+-2HCl]，402(66)，400(96)。
14)1-甲基-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(4″-甲氧基-3″-硝基苯基)-咪唑6a
将4-甲氧基-3-硝基苯甲醛(76mg，0.42mmol)和33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)在乙醇(15mL)中的混合物用AcOH(150μL)处理并回流2小时。在冷却至室温后，添加溶解在DME(10mL)中的化合物4b(172mg，0.42mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)，并且将该反应混合物回流3小时。蒸发溶剂，用乙酸乙酯稀释残余物，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过柱色谱(硅胶60，用乙酸乙酯到5％甲醇/乙酸乙酯洗脱)纯化残余物。产量：100mg(0.22mmol，52％)；黄色油状物；Rf＝0.36(乙酸乙酯)；vmax(ATR)/cm-12937，2832，1622，1599，1548，1526，1506，1480，1462，1351，1263，1231，1185，1165，1110，1092，1042，998，909，889，868，824，808，760，728；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.46(3H，s)，3.64(3H，s))，3.75(3H，s)，3.97(3H，s)，6.97(1H，s)，7.12(1H，s)，7.16(1H，d，J＝8.7Hz)，7.46(1H，d，J＝8.7Hz)，7.51(1H，s)，7.80(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ32.2，55.7，56.7，60.4，110.0，114.2，117.4，122.2，122.5，126.1，127.4，131.2，136.5，137.5，137.9，139.7，145.0，152.9，153.3；m/z(EI)448(100)[M+]，446(97)[M+]，433(37)，431(41)，206(27)，164(23)。
15)1-甲基-5-(3″-氨基-4″-甲氧基苯基)-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-咪唑6b
与5b类似，用Zn粉(72mg，1.11mmol)和THF(8.5mL)中的浓HCl(160μL.)还原化合物6a(100mg，0.22mmol)。在后处理后，通过柱色谱(硅胶60；乙酸乙酯/甲醇95∶5)纯化残余物。产量：83mg(0.20mmol，91％)；mp 166-169℃的无色固体；Rf＝0.48(乙酸乙酯)；UV(MeOH)λmax(ε)274(12760)；vmax(ATR)/cm-13458，3365，3192，2935，2833，1616，1597，1546，1510，1483，1462，1420，1372，1318，1279，1245，1223，1174，1109，1040，1024，997，868，804，759，658；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.41(3H，s)，3.57(3H，s)，3.67(3H，s)，3.82(3H，s)，4.91(2H，s)，6.55(1H，d，J＝8.2Hz)，6.61(1H，s)，6.94(1H，d，J＝8.2Hz)，7.09(1H，s)，7.26(1H，s)，7.71(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)δ31.6，55.4，60.0，109.4，110.9，115.3，116.4，118.2，120.8，122.2，129.8，132.7，134.2，138.3，143.5，146.7，152.8；m/z(EI)418(100)[M+]，416(96)[M+]，403(78)，401(85)，307(17)，169(22)。
16)1-甲基-5-(3″-氨基-4″-甲氧基苯基)-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-咪唑二(盐酸盐)6b×2HCl
将化合物6b(61mg，0.15mmol)溶解在DCM中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在室温下搅拌15min后除去溶剂并从乙醇/正己烷混合物中重结晶残余物。产量：72mg(0.15mmol，100％)；mp 198-200℃的无色固体；vmax(ATR)/cm-1 3011，2801，2567，1633，1549，1515，1494，1446，1405，1305，1272，1145，1113，1041，1022，994，867，852，829，718；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ3.63(3H，s)，3.69(3H，s)，3.73(3H，s)，3.93(3H，s)，7.18(1H，d，J＝2.0Hz)，7.22(1H，d，J＝2.0Hz)，7.3-7.4(3H，m)，9.37(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)δ33.9，56.1，60.2，111.3，112.5，117.0，117.6，122.4，124.2，127.5，129.6，135.8，146.0，151.6，153.3。
17)1-甲基4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(3″-氟-4″-甲氧基苯基)-咪唑6c
与5a的合成类似，从沸腾的乙醇(15mL)中的3-氟-4-甲氧基苯甲醛(65mg，0.42mmol)、33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)和乙酸(150μL)制备化合物6c，给出亚胺中间体，该亚胺中间体用溶解在DME(10mL)中的化合物4b(172mg，0.42mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)处理。在后处理后，通过柱色谱(硅胶60；用乙酸乙酯到5％甲醇/乙酸乙酯洗脱)纯化残余物。产量：135mg(0.32mmol，76％)；无色胶质；Rf＝0.67(乙酸乙酯)；UV(MeOH)λmax(ε)275(12280)；vmax(ATR)/cm-12934，2832，1598，1548，1511，1483，1462，1418，1300，1265，1233，1214，1166，1131，1109，1041，1022，997，895，865，816，807，760，656；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.45(3H，s)，3.58(3H，m)，3.68(3H，s)，3.90(3H，s)，7.01(1H，s)，7.16(1H，s)，7.2-7.4(3H，m)，7.78(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ31.8，55.4，56.1，60.1，109.6，114.3，116.5，117.9，118.2，121.1，122.3，122.4，127.5，127.6，127.7，132.3，135.2，138.1，143.8，147.5，147.7，149.8，153.0，153.1；m/z(EI)421(51)[M+]，419(49)[M+]，406(23)，404(22)，233(11)，175(31)，117(75)，59(100)。
18)1-甲基-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(3″-氟-4″-甲氧基苯基)-咪唑盐酸盐6c×HCl
将化合物6c(135mg，0.32mmol)溶解在DCM(5mL)中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在搅拌15min后，除去溶剂，并从DCM/正己烷混合物中重结晶油状残余物，给出盐酸盐。产量：91mg(0.20mmol，63％)；mp 103-106℃(dec)的无色固体；UV(MeOH)λmax(ε)270(11680)；vmax(ATR)/cm-13413，3012，2936，2841，2626，1625，1547，1523，1493，1463，1421，1304，1271，1234，1203，1134，1116，1041，994，869，849，818，760；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.64(3H，s)，3.68(3H，s)，3.73(3H，s)，3.92(3H，s)，7.16(1H，d，J＝2.0Hz)，7.19(1H，d，J＝2.0Hz)，7.3-7.4(1H，m)，7.39(1H，t，J＝17.2Hz)，7.51(1H，dd，J＝12.0Hz，J＝2.0Hz)，9.28(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ34.3，56.5，56.7，60.7，111.9，115.1，117.4，118.3，118.4，118.8，119.0，123.0，125.1，128.6，128.8，129.3，136.3，146.4，149.2，149.3，150.2，153.5，153.8。
19)1-甲基-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(4″-N，N-二甲基氨基苯基)-咪唑6d
与5a的合成类似，从沸腾的乙醇(15mL)中的4-N，N-二甲基氨基苯甲醛(63mg，0.42mmol)、33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)和乙酸(150μL)制备化合物6d，给出亚胺中间体，用溶解在DME(10mL)中的化合物4b(172mg，0.42mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)处理该亚胺中间体。在后处理后，通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。产量：140mg(0.34mmol，81％)；无色胶质；Rf＝0.65(乙酸乙酯/甲醇95∶5)；vmax(ATR)/cm-12933，2828，1612，1546，1515，1481，1462，1357，1314，1258，1228，1187，1164，1108，1039，999，944，873，859，821，806，758，738，717，659；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.94(6H，s)，3.39(3H，s)，3.56(3H，s)，3.74(3H，s)，6.72(2H，d，J＝8.9Hz)，7.00(1H，d，J＝1.9Hz)，7.10(2H，d，J＝8.9Hz)，7.35(1H，d，J＝1.9Hz)，7.46(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ31.8，40.2，55.5，60.3，109.5，112.3，116.8，117.2，122.1，129.7，131.3，132.3，135.8，136.7，144.2，150.5，152.9；m/z(EI)417(54)，415(68)，402(28)，400(26)，278(54)，250(58)，234(63)，206(83)，145(84)，125(87)，42(100)。
20)1-甲基-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(4″-N，N-二甲基氨基苯基)-咪唑二(盐酸盐)6d×2HCl
将化合物6d(140mg，0.34mmol)溶解在DCM中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在室温下搅拌15min后，除去溶剂并从乙醇/正己烷混合物中重结晶残余物。产量：68mg(0.14mmol，41％)；mp 189-193℃(dec)的无色固体；UV(MeOH)λmax(ε)265(21220)；vmax(ATR)/cm-13357，2541，2451，1593，1546，1497，1470，1421，1316，1277，1230，1190，1159，1129，1046，987，843；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.99(6H，s)，3.63(3H，s)，3.68(3H，s)，3.73(3H，s)，6.94(2H，d，J＝8.9Hz)，7.21(2H，s)，7.32(2H，d，J＝8.9Hz)，9.35(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)δ33.9，56.1，60.2，111.3，112.9，116.9，122.3，124.4，126.9，130.8，131.5，135.3，145.9，150.9，153.3。
21)1-甲基-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(4″-乙氧基-3″-硝基苯基)-咪唑6e
将4-乙氧基-3-硝基苯甲醛(82mg，0.42mmol)和33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)在乙醇(15mL)中的混合物用AcOH(150μL，2.63mmol)处理并回流2小时。在冷却至室温后，添加4b(172mg，0.42mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)并且将该反应混合物回流5小时。蒸发溶剂，用乙酸乙酯稀释残余物，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过柱色谱(硅胶60，乙酸乙酯/甲醇9∶1)纯化残余物，给出为橙色油状产物。产量：170mg(0.37mmol，88％)；vmax(ATR)/cm-1：2983，2936，1622，1599，1547，1527，1505，1472，1353，1247，1110，1039，997，865，808，759，739，655，634；1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ1.41(3H，t，3J7.0Hz，Me)，3.42(3H，s，NMe)，3.60(3H，s，4’-OMe)，3.72(3H，s，5’-OMe)，4.16(2H，q，3J7.0Hz，OCH2)，6.92(1H，d，4J2.0Hz，6’-H)，7.0-7.1(2H，m，2’-H，5”-H)，7.40(1H，dd，3J8.7Hz，4J2.3Hz，6”-H)，7.47(1H，s，2-H)，7.73(1H，d，4J2.3Hz，2”-H)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)：δ14.2(Me)，32.1(NMe)，55.6(5’-OMe)，60.3(4’-OMe)，65.5(OCH2)，109.8(C-6’)，115.0(C-5”)，117.2(C-3’)，121.8(C-1”)，122.3(C-2’)，126.1(C-5)，127.1(C-6”)，131.2(C-1’)，136.2(C-2”)，137.2(C-4)，137.7(C-2)，139.9(C-3”)，144.8(C-4’)，152.1(C-5’)，153.1(C-4”)；m/z(％)463(99)[M+]，461(100)[M+]，447(46)，445(45)。
22)1-甲基-5(3″-氨基-4″-乙氧基苯基)-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-咪唑6f×2HCl
将化合物6e(170mg，0.37mmol)溶解在THF(7.5mL)中。加入Zn粉(120mg，1.83mmol)接着加入浓HCl(264μL)在THF(1mL)中的混合物。在室温下搅拌15min后将反应混合物倒入水中并用NaHCO3水溶液碱化至约pH 8。用乙酸乙酯萃取水相并经Na2SO4干燥有机相，过滤并在真空中浓缩滤液。通过柱色谱(硅胶60，10％甲醇/乙酸乙酯，Rf＝0.64)纯化残余物，给出苯胺中间体。将这种化合物溶解在DCM(5mL)中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在搅拌15min后除去溶剂并且将残余物从DCM/正己烷混合物中重结晶。产量：121mg(0.22mmol，65％)；m.p.＞160℃(dec)的无色固体；vmax(ATR)/cm-1：3369，2936，2829，2540，1632，1547，1492，1411，1395，1303，1270，1235，1141，1114，1038，993，862，818，720；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.40(3H，t，3J6.9Hz，Me)，3.63(3H，s，NMe)，3.70(3H，s，4’-OMe)，3.72(3H，s，5’-OMe)，4.19(2H，q，3J6.9Hz，OCH2)，7.1-7.3(4H，m，2’-H，6’-H，5”-H，6”H)，7.45(1H，s，2”-H)，9.41(1H，s，2-H)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)：δ14.4(Me)，34.0(NMe)，56.2(5’-OMe)，60.2(4’-OMe)，64.6(OCH2)，111.4(C-6’)，113.7(C-5”)，117.0(C-3’)，117.5(C-1”)，122.4(C-2’)，124.2(C-5)，127.6(C-1’)，129.3(C-4)，135.8(C-2)，146.0(C-4’)，151.7(C-5’)，153.3(C-4”)；m/z(％)433(100)[M+]，431(100)[M+]，416(31)，404(16)，402(15)，36(69)。
23)1-甲基-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(3″-氟-4″-乙氧基苯基)-咪唑6g×HCl
将3-氟-4-乙氧基苯甲醛(71mg，0.42mmol)和33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)在乙醇(15mL)中的混合物用AcOH(150μL，2.63mmol)处理并回流2小时。在冷却至室温后，添加4b(172mg，0.42mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)并且将该反应混合物回流5小时。蒸发溶剂，用乙酸乙酯稀释残余物，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过柱色谱(硅胶60，乙酸乙酯/甲醇9∶1)纯化残余物。将所得的无色油溶解在DCM(5mL)中并且用3M HCl/二噁烷处理。将反应混合物在室温下搅拌10min，并蒸发溶剂。从DCM/正己烷中重结晶残余物。产量：160mg(0.34mmol，81％)；mp 90℃的无色固体；vmax(ATR)/cm-1：3391，3111，2976，2939，2884，2833，2620，1626，1547，1523，1494，1474，1421，1397，1304，1270，1233，1115，1039，995，927，885，851，809，778，756；1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ1.37(3H，t，3J6.9Hz)，3.71(3H，s)，3.73(3H，s)，4.19(2H，q，3J6.9Hz)，7.14(1H，d，4J2.0Hz)，7.26(1H，d，4J2.0Hz)，7.2-7.3(2H，m)，7.37(1H，t，3J17.1Hz)，7.51(1H，dd，3J11.9Hz，4J1.9Hz)，9.37(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)：δ14.4，33.9，56.1，60.2，64.6，111.5，115.5，116.9，118.6，122.5，124.3，128.2，128.9，135.7，146.1，148.2，153.3；m/z(％)436(100)[M+]，434(100)[M+]，421(96)，419(95)，340(12)，36(15)。
24)1-甲基-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3″-氯吲哚-5″-基)-咪唑6i
与5a的合成类似，从沸腾的乙醇(15mL)中的N-甲基-3-氯吲哚-5-甲醛的亚胺(81mg，0.42mmol)、33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)和乙酸(150μL)获得化合物6i，用4b(170mg，0.42mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)处理。在后处理后，通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。产量：130mg(0.28mmol，67％)；无色油状物；Rf＝0.63(乙酸乙酯/甲醇95∶5)；vmax(ATR)/cm-1：3113，2835，2825，1597，1561，1504，1474，1461，1418，1396，1373，1312，1256，1240，1164，1109，1042，997，971，907，875，854，808，728；1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ3.41(3H，s，1-NMe)，3.48(3H，s，5’-OMe)，3.73(3H，s，4’-OMe)，3.75(3H，s，1”-NMe)，7.01(1H，d，4J1.9Hz，6’-H)，7.05(1H，s，2”-H)，7.14(1H，dd，3J8.6Hz，4J1.6Hz，6”-H)，7.30(1H，d，4J1.9Hz，2’-H)，7.35(1H，d，4J8.6Hz，7”-H)，7.52(1H，s，2-H)，7.56(1H，d，4J1.6Hz，4”-H)；13C-NMR(75.5MHz，CDCl3)：δ32.0(1-NMe)，33.0(1”-NMe)，55.5(5’-OMe)，60.4(4’-OMe)，104.6(C-3”)，109.7(C-6’)，110.2(C-7”)，117.2(C-3’)，120.5(C-4”)，121.4(C-5”)，122.2(C-2’)，125.1(C-6”)，126.0(C-3a”)，126.3(C-2”)，129.8(C-5)，132.1(C-1’)，135.7(C-7a”)，136.2(C-4)，136.9(C-2)，144.4(C-4’)，152.9(C-5’)；m/z(EI)461(100)[M+]，459(82)[M+]，446(59)，444(57)。
25)1-甲基-4-(3′-溴-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3″-氯吲哚-5″-基)-咪唑-盐酸盐6i×HCl
将化合物6i(130mg，0.28mmol)溶解在DCM(5mL)中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在室温下搅拌15min后在真空中蒸发溶剂并从乙醇/正己烷中重结晶残余物。产量：109mg(0.20mmol，73％)；无色固体；mp.146℃；UV(MeOH)λmax(ε)230(34040)；vmax(ATR)/cm-1：3392，2941，2591，1622，1592，1544，1490，1464，1406，1317，1263，1239，1146，1115，1042，995，973，874，853，809；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ3.61(6H，s，1-NMe，5’-OMe)，3.70(3H，s，4’-OMe)，3.86(3H，s，1”-NMe)，7.14(1H，d，4J2.1Hz，6’-H)，7.26(1H，d，4J2.1Hz，2’-H)，7.34(1H，dd，3J8.5Hz，4J1.6Hz，6”-H)，7.7-7.8(3H，m，2”-H，4”-H，7”-H)，9.36(1H，s，2-H)；13C-NMR(75.5MHz，DMSO-d6)：δ33.0(1-NMe)，33.9(1”-NMe)，56.0(5’-OMe)，60.2(4’-OMe)，102.7(C-3”)，111.4(C-6’)，111.8(C-7”)，116.9(C-5”)，117.0(C-3’)，120.4(C-4”)，122.3(C-2’)，124.5(C-6”)，124.7(C-3a”)，125.1(C-7a”)，127.7(C-5)，128.3(C-2”)，130.9(C-1’)，135.5(C-2)，136.0(C-4)，145.9(C-4’)，153.2(C-5’)；m/z(EI)461(100)[M+-2HCl]，459(82)[M+-2HCl]，446(59)，444(57)。
26)4-(3′，4′-二甲氧基-5′-硝基苯基)-5-(4″-甲氧基-3″-硝基苯基)-噁唑7a
将化合物4c(170mg，0.45mmol)、4-甲氧基-3-硝基苯甲醛(82mg 0.74mmol)和无水K2CO3(590mg，4.3mmol)溶解在DME/甲醇(1∶3，20mL)中并且搅拌2小时。将该溶液在真空中浓缩，溶解在乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩滤液。通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。产量：140mg(0.35mmol，78％)；mp 155℃的黄色固体；Rf＝0.30(乙酸乙酯/正己烷1∶1)；vmax(ATR)/cm-13147，2945，2846，1625，1564，1522，1482，1456，1441，1342，1278，1267，1256，1184，1162，1126，1111，1058，1005，985，849，832；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.84(3H，s)，3.96(3H，s)，3.97(3H，s)，7.13(1H，d，J＝8.9Hz)，7.38(1H，d，J＝2.0Hz)，7.54(1H，d，J＝2.0Hz)，7.74(1H，dd，J＝8.9Hz，J＝2.3Hz)，7.93(1H，s)，8.07(1H，d，J＝2.3Hz)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ56.4，56.7，62.0，114.1，114.8，120.4，124.0，127.3，132.2，132.9，139.7，142.7，144.0，144.9，150.1，153.2，154.3；m/z(EI)401(34)[M+]，400(100)，385(12)，339(7)。
27)4-(3′，4′-二甲氧基-5′-硝基苯基)-5-(4″-N，N-二甲基氨基苯基)-噁唑7b
将化合物4c(170mg，0.45mmol)、4-N，N-二甲基氨基苯甲醛(67mg 0.45mmol)和无水K2CO3(590mg，4.3mmol)溶解在DME/甲醇(1∶3，20mL)中并且搅拌2小时。将该溶液在真空中浓缩，溶解在乙酸乙酯中，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩滤液。通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。产量：70mg(0.19mmol，42％)；黄色油状物；Rf＝0.30(乙酸乙酯/正己烷1∶2)；vmax(ATR)/cm-12941，2886，1611，1532，1518，1445，1352，1264，1230，1190，1167，1104，1053，992，944，920，870，854，818，784，771，733，697；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.99(6H，s)，3.84(3H，s)，3.97(3H，s)，6.69(2H，d，J＝9.1Hz)，7.44(2H，d，J＝9.1Hz)，7.48(1H，d，J＝2.0Hz)，7.65(1H，d，J＝2.0Hz)，7.86(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ40.1，56.4，62.0，111.9，114.5，114.8，115.0，128.2，128.8，130.1，141.8，145.0，147.8，149.1，150.9，153.9；m/z(EI)369(100)[M+]，308(7)，132(12)。
28)1-甲基-5-(3″-苄氧基-4″-甲氧基苯基)-4-(3′，4′-二甲氧基-5′-硝基苯基)咪唑7c
将3-苄氧基-4-甲氧基苯甲醛(102mg，0.42mmol)和33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)在乙醇(15mL)中的混合物用AcOH(150μL，2.63mmol)处理并回流2小时。在冷却至室温后，添加溶解在DME(5mL)中的4c(158mg，0.42mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)并且将该反应混合物回流3小时。蒸发溶剂，用乙酸乙酯稀释残余物，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。产量：130mg(0.27mmol，64％)；红色油状物；Rf＝0.58(乙酸乙酯/甲醇95∶5)；vmax(ATR)/cm-1 2939，2837，1529，1509，1454，1358，1248，1169，1136，1110，1060，1021，993，919，858，814，764，729，696；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.25(3H，s)，3.61(3H，s)，3.86(3H，s)，3.89(3H，s)，5.09(2H，s)，6.74(1H，d，J＝2.0Hz)，6.85(1H，dd，J＝8.2Hz，J＝1.9Hz)，6.95(1H，d，J＝1.9Hz)，7.1-7.3(6H，m)，7.36(1H，d，J＝2.0Hz)，7.45(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ31.7，55.8，55.9，61.7，71.0，112.1，113.0，113.4，116.3，121.6，123.7，127.0，127.8，128.4，129.4，130.9，135.4，136.4，137.2，140.5，144.6，148.2，150.4，153.3；m/z(EI)475(62)，458(26)，384(21)，337(22)，91(100)，65(36)。
29)1-甲基-4-(3′，4′-二甲氧基-5′-硝基苯基)-5-(3″-氟-4″-甲氧基苯基)-咪唑7d
将3-氟-4-甲氧基苯甲醛(77mg，0.42mmol)和33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)在乙醇(15mL)中的混合物用AcOH(150μL，2.63mmol)处理并且回流2小时。在冷却至室温后，加入溶解在DME(5mL)中的化合物4c(158mg，0.42mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)并且将该反应混合物回流3小时。蒸发溶剂，用乙酸乙酯稀释残余物，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。产量：120mg(0.31mmol，74％)；红色油状物；Rf＝0.45(乙酸乙酯/甲醇95∶5)；vmax(ATR)/cm-12941，2841，1530，1511，1462，1357，1300，1267，1238，1131，1110，1021，993，920，867，855，817，761，730，657；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.43(3H，s)，3.69(3H，s)，3.86(3H，s)，3.89(3H，s)，7.0-7.1(3H，m)，7.29(1H，d，J＝2.0Hz)，7.30(1H，d，J＝2.0Hz)，7.50(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ32.0，56.0，56.1，61.8，113.2，113.7，113.9，117.9，118.2，121.9，122.0，126.9，128.2，130.7，135.9，137.5，140.7，144.7，148.3，148.5，150.7，153.5，154.0；m/z(EI)387(100)[M+]，372(34)，212(20)。
30)N-甲基-3-氯吲哚-5-甲醛7e′
将N-甲基吲哚-5-甲醛(400mg，2.5mmol)溶解在干乙腈(10mL)中并且用N-氯代琥珀酰亚胺(400mg，3.02mmol)处理，于是溶液变红。将该反应混合物在室温下搅拌20小时。在真空中除去溶剂并且通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。产量：300mg(1.55mmol，62％)；mp 109℃的无色固体；Rf＝0.27(乙酸乙酯/正己烷1∶4)；vmax(ATR)/cm-1 3103，2845，2751，1680，1602，1454，1414，1362，1343，1274，1238，1196，1160，1134，1111，981，894，796，717；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.75(3H，s)，7.07(1H，s)，7.32(1H，d，J＝8.6Hz)，7.76(1H，dd，J＝8.6Hz，J＝1.5Hz)，8.07(1H，d，J＝1.5Hz)，10.01(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ32.9，106.3，109.9，122.0，123.3，125.2，126.9，129.2，138.5，191.7；m/z(EI)193(100)[M+]，164(57)，128(43)，101(48)，87(28)。
31)1-甲基-4-(3′，4′-二甲氧基-5′-硝基苯基)-5-(N-甲基-3″-氯吲哚-5″-基)-咪唑7e
将N-甲基-5-氯吲哚-3-甲醛(81mg，0.42mmol)和33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)在乙醇(15mL)中的混合物用AcOH(150μL，2.63mmol)处理并且回流2小时。在冷却至室温后，加入化合物4c(170mg，0.43mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)并且将该反应混合物回流3小时。蒸发溶剂，用乙酸乙酯稀释残余物，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。产量：120mg(0.28mmol，67％)；红色油状物；Rf＝0.52(乙酸乙酯/甲醇95∶5)；vmax(ATR)/cm-1 3118，2940，2830，1528，1507，1478，1357，1263，1239，1111，1060，993，863，804，730；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.42(3H，s)，3.57(3H，s)，3.76(3H，s)，3.84(3H，s)，7.07(1H，s)，7.14(1H，dd，J＝8.5Hz，J＝1.6Hz)，7.3-7.4(3H，m)，7.54(1H，s)，7.55(1H，d，J＝1.6Hz)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ32.0，33.0，55.9，61.7，104.6，110.5，113.0，113.5，120.4，120.9，124.8，126.1，126.5，130.5，131.2，135.5，135.8，137.1，140.4，144.6，153.3；m/z(EI)428(38)[M+]，426(100)[M+]，411(26)。
32)4-(3′-氨基-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(3″-氨基-4″-甲氧基苯基)-噁唑8a
将化合物7a(120mg，0.30mmol)悬浮在甲醇(20mL)中并且用甲酸铵(590mg，9.37mmol)和Pd/C(5％，180mg)处理。将悬浮液回流2小时，并且在冷却至室温后，在硅藻土上过滤混合物，在真空中浓缩滤液并且通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。产量：70mg(0.21mmol，70％)；mp 63℃的浅棕色固体；Rf＝0.55(乙酸乙酯)；UV(MeOH)λmax(ε)285(7720)；vmax(ATR)/cm-1 3457，3361，2935，2834，1613，1587，1515，1428，1378，1222，1175，1137，1105，999，843，802，760；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.73(3H，s)，3.80(3H，s)，3.82(3H，s)，3.9-4.0(4H，宽峰s)，6.6-6.8(3H，m)，6.9-7.0(2H，m)，7.83(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ55.4，55.6，59.8，102.1，108.2，110.1，113.2，117.6，121.5，128.1，133.2，135.6，136.1，140.4，145.7，147.6，148.9，152.7；m/z(EI)343(45)，341(66)[M+]，326(46)，298(22)，197(63)，91(100)，57(75)。
33)4-(3′-氨基-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(3″-氨基-4″-甲氧基苯基)-噁唑8ax 2HCl
将化合物8a(60mg，0.18mmol)溶解在DCM(5mL)中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在室温下搅拌该反应混合物15min并且收集形成的无色沉淀，用DCM洗涤并且在真空中干燥。产量：28mg(0.07mmol，39％)；mp 227℃的无色固体；UV(MeOH)λmax(ε)292(11960)；vmax(ATR)/cm-12837，2553，1633，1567，1518，1495，1376，1270，1142，1102，1052，996，934，869，839，817，760，722；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.74(3H，s)，3.85(3H，s)，3.92(3H，s)，7.10(1H，s)，7.19(1H，s)，7.25(1H，d，J＝8.7Hz)，7.4-7.5(1H，m)，7.56(1H，d，J＝2.1Hz)，8.52(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)δ55.9，56.2，60.7，108.9，112.6，113.1，120.2，120.6，124.8，125.4，127.5，128.9，132.4，140.3，144.3，151.2，151.6，152.7；m/z(EI)341(100)[M+-2HCl]，376(72)，298(25)，255(12)，212(7)，184(7)，135(8)，78(11)，65(6)。
34)4-(3′-氨基-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(4″-N，N-二甲基氨基苯基)-噁唑8b
将化合物7b(100mg，0.27mmol)悬浮在甲醇(20mL)中并且用甲酸铵(590mg，9.37mmol)和Pd/C(5％，180mg)处理。将悬浮液回流2小时，并且在冷却至室温后，在硅藻土上过滤混合物，在真空中浓缩滤液并且通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。产量：60mg(0.18mmol，67％)；无色油状物；Rf＝0.77(乙酸乙酯/甲醇95∶5)；vmax(ATR)/cm-1 3427，3295，3189，2927，2820，1617，1583，1523，1512，1445，1426，1382，1363，1327，1278，1227，1190，1146，1105，1057，1005，949，842，817；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.96(6H，s)，3.76(3H，s)，3.82(3H，s)，6.6-6.8(4H，m)，7.49(2H，d，J＝9.1Hz)，7.82(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ40.1，55.7，59.9，102.0，108.0，111.8，116.4，128.0，128.5，132.2，135.5，140.4，146.3，148.6，150.4，152.8；m/z(EI)339(82)[M+]，324(70)，296(25)，253(44)，159(41)，148(100)，133(59)，119(84)，78(67)，42(54)。
35)4-(3′-氨基-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(4″-N，N-二甲基氨基苯基)-噁唑二(盐酸盐)8b×2HCl
将化合物8b(58mg，0.17mmol)溶解在DCM(5mL)中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在室温下搅拌该反应混合物15min，除去溶剂并且将形成的无色固体从DCM/正己烷中重结晶。产量：70mg(0.17mmol，100％)；mp 74℃的黄色固体；UV(MeOH)λmax(ε)327(18200)，259(16360)；vmax(ATR)/cm-13382，2941，2840，2548，1572，1541，1512，1496，1418，1378，1276，1251，1104，1062，991，935，870，850；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.99(6H，s)，3.74(3H，s)，3.87(3H，s)，6.9-7.1(2H，m)，7.22(1H，d，J＝1.9Hz)，7.28(1H，d，J＝1.9Hz)，7.49(2H，d，J＝8.9Hz)，8.46(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)δ40.7，55.9，61.0，110.4，113.8，113.9，126.7，128.0，128.2，130.9，141.0，145.9，149.4，150.7，152.6；m/z(EI)339(82)[M+-2HCl]，324(70)，296(25)，253(44)，159(41)，148(100)，133(59)，119(84)，78(67)，42(54)。
36)1-甲基-4-(3′-氨基-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(3″-羟基-4-甲氧基苯基)-咪唑二(盐酸盐)8c×2HCl
将化合物7c(120mg，0.31mmol)溶解在甲醇(20mL)中并且用甲酸铵(590mg，9.37mmol)和Pd/C(5％，180mg)处理。将悬浮液回流2小时，并且在冷却至室温后，在硅藻土上过滤混合物，在真空中浓缩滤液并且通过柱色谱纯化残余物给出8c(硅胶60，乙酸乙酯/甲醇95∶5，Rf＝0.25)。将化合物8c溶解在DCM(5mL)中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在室温下搅拌该反应混合物15min。除去溶剂并且通过DCM反复共沸蒸馏使残余物不含二噁烷。从乙醇/正己烷中重结晶残余固体。产量：70mg(0.16mmol，53％)；mp 218℃(dec)的无色固体；UV(MeOH)λmax(ε)275(11300)；vmax(ATR)/cm-133032，2967，2522，1620，1590，1534，1508，1432，1328，1292，1251，1211，1135，1109，1051，1026，992，855，813，766；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.61(3H，s)，3.73(3H，s)，3.77(3H，s)，3.83(3H，s)，6.75(1H，d，4J1.7Hz)，6.8-7.0(3H，m)，7.09(1H，d，3J8.5Hz)，9.33(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)：δ33.9，55.6，55.9，60.3，109.5，112.7，117.5，122.1，122.8，128.2，129.9，135.2，147.1，149.3，152.6；m/z(EI)356(33)，355(85)[M+-2HCl]，341(42)，340(100)。
37)1-甲基-4-(3′-氨基-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(3″-氟-4-甲氧基苯基)-咪唑8d
将化合物7d(120mg，0.31mmol)溶解在甲醇(20mL)中并且用甲酸铵(590mg，9.37mmol)和Pd/C(5％，180mg)处理。将悬浮液回流2小时，并且在冷却至室温后，在硅藻土上过滤混合物，在真空中浓缩滤液并且通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。产量：80mg(0.25mmol，81％)；无色胶质；Rf＝0.33(乙酸乙酯/甲醇95∶5)；vmax(ATR)/cm-13448，3364，2940，2835，1610，1561，1517，1500，1463，1442，1394，1301，1268，1237，1208，1132，1107，1049，1024，1002，892，877，848，817，761，658；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.38(3H，s)，3.5-3.6(2H，宽峰s)，3.59(3H，s)，3.72(3H，s)，3.87(3H，s)，6.47(1H，d，J＝1.9Hz)，6.48(1H，d，J＝1.9Hz)，6.9-7.1(3H，m)，7.45(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ31.9，55.2，56.1，59.7，100.1，106.9，113.5，118.2，118.4，123.1，123.2，126.9，127.0，127.1，130.3，134.6，137.0，138.1，140.0，147.7，147.9，150.5，152.4，153.7；m/z(EI)358(57)，357(93)[M+]，343(75)，342(100)，282(47)，243(51)，229(50)，200(42)，158(34)，42(72)。
38)1-甲基-4-(3′-氨基-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(3″-氟-4-甲氧基苯基)-咪唑二(盐酸盐)8d×2HCl
将化合物8d(80mg，0.25mmol)溶解在DCM(5mL)中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在室温下搅拌该反应混合物15min。除去溶剂并且通过DCM反复共沸蒸馏使残余物不含二噁烷。从乙醇/正己烷中重结晶残余固体。产量：90mg(0.21mmol，84％)；mp 214-217℃的无色固体；UV(MeOH)λmax(ε)270(11100)；vmax(ATR)/cm-1 2969，2323，1625，1555，1526，1494，1473，1422，1341，1305，1278，1242，1178，1131，1112，1061，1025，974，858，825，763；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.63(3H，s)，3.77(3H，s)，3.78(3H，s)，3.92(3H，s)，6.66(1H，s)，7.05(1H，s)，7.2-7.3(1H，m)，7.35(1H，t，J＝17.3Hz)，7.47(1H，d，J＝12.0Hz)，9.37(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)δ34.0，55.0，56.2，60.3，111.4，114.7，117.6，117.7，118.2，118.5，122.6，128.1，128.5，129.0，135.4，140.0，148.7，148.8，149.8，152.6，153.0；m/z(EI)358(63)，357(96)[M+-2HCl]，343(79)，342(100)，284(37)。
39)1-甲基-4-(3′-氨基-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3″-氯吲哚-5″-基)-咪唑8e
将化合物7e(120mg，0.28mmol)溶解在THF(7.5mL)中并且通过添加Zn粉(90mg，1.39mmol)和THF(1mL)中的浓HCl(200μL)还原。在后处理后，通过柱色谱(硅胶60)纯化残余物。产量：70mg(0.18mmol，64％)；无色油状物；Rf＝0.44(乙酸乙酯/甲醇95∶5)；vmax(ATR)/cm-13359，3113，2934，2825，1613，1593，1511，1480，1447，1423，1396，1336，1239，1224，1139，1109，1000，974，907，864，803，726；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.39(3H，s)，3.52(3H，s)，3.70(3H，s)，3.74(3H，s)，6.50(1H，d，J＝1.9Hz)，6.58(1H，d，J＝1.9Hz)，7.05(1H，s)，7.16(1H，dd，J＝8.5Hz，J＝1.6Hz)，7.32(1H，d，J＝8.5Hz)，7.50(1H，s)，7.58(1H，d，J＝1.6Hz)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ32.0，33.0，55.3，59.7，101.0，104.6，106.8，110.1，120.6，122.1，125.5，125.9，126.1，129.1，130.8，134.5，135.6，136.6，137.6，139.8，152.4；m/z(EI)398(19)[M+]，396(56)[M+]，383(37)，381(100)，321(11)，282(12)，42(23)。
40)1-甲基-4-(3′-氨基-4′，5′-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3″-氯吲哚-5″-基)-咪唑三(盐酸盐)8e×2HCl
将化合物8e(70mg，0.18mmol)溶解在DCM(5mL)中并且用3M HCl/二噁烷(1mL)处理。在室温下搅拌该反应混合物15min。除去溶剂并且通过DCM反复共沸蒸馏使残余物不含二噁烷。从乙醇/正己烷中重结晶残余固体。产量：62mg(0.12mmol，68％)；mp＞300℃(dec)的棕色固体；UV(MeOH)λmax(ε)224(30100)；vmax(ATR)/cm-13356，2830，2570，1623，1554，1498，1456，1423，1408，1332，1284，1272，1237，1145，1112，1064，991，973，857，804；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.61(3H，s)，3.63(3H，s)，3.73(3H，s)，3.89(3H，s)，6.52(1H，s)，6.79(1H，s)，7.30(1H，dd，J＝8.5Hz，J＝1.6Hz)，7.6-7.8(3H，m)，9.35(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)δ33.0，34.0，55.7，60.0，102.7，111.7，117.0，120.3，122.8，124.6，125.1，128.0，128.9，130.4，135.1，136.0，152.5；m/z(EI)396(42)[M+-2HCl]，383(45)，381(78)，331(21)，160(100)，57(59)，41(65)。
41)(3-氟-4-甲氧基苯基)-(对甲苯磺酰基)甲基异氰化物4d
将3-氟-4-甲氧基苯甲醛(3.9g，22.94mmol)、对甲苯亚磺酸(3.0g，19.29mmol)、樟脑磺酸(110mg)和甲酰胺(10mL)的混合物在65℃搅拌16小时。在冰浴中冷却后，用水处理混合物，并分离所得沉淀，用一点甲醇洗涤并在真空中干燥以留下N-取代的甲酰胺(1.9g，5.64mmol，30％)。将这种化合物溶解在干DME(50mL)中，冷却至-5℃并且用POCl3(1.7mL)和Et3N(4.15mL)处理。将反应混合物在-5℃搅拌2小时。将所得悬浮液倒在冰水上并用乙酸乙酯萃取。用NaHCO3水溶液和盐水洗涤有机相，经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩滤液。通过柱色谱(硅胶60)纯化由此获得的残余物。产量：560mg(1.76mmol，31％)；Rf＝0.41(乙酸乙酯/正己烷，1∶2)；mp 86-90℃(dec.)的棕色固体；vmax(ATR)/cm-12947，2845，2134，1620，1595，1518，1441，1324，1304，1273，1225，1148，1126，1082，1018，811，761，664；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.46(3H，s)，3.90(3H，s)，5.50(1H，s)，6.05(1H，t，JHF＝16.8Hz)，7.0-7.2(2H，m)，7.33(2H，d，J＝7.4Hz)，7.63(2H，d，J＝7.4Hz)；13C NMR(75.5MHz，CDCl3)δ21.8，56.3，75.6，113.1，113.2，116.1，116.3，118.8，118.9，124.9，125.0，129.9，130.5，146.8，149.7，149.8，150.3，153.6，166.3；m/z(EI)344(12)[M+]，319(5)，278(34)，246(22)，164(100)，155(61)，139(74)，102(33)，91(99)，65(44)。
42)1-甲基-5-(3-溴-4，5-二甲氧基苯基)-4-(3-氟-4-甲氧基苯基)咪唑×HCl 9a
将3-溴-4，5-二甲氧基苯甲酰胺(86mg，0.35mmol)和33％MeNH2/乙醇(220μL，1.78mmol)在乙醇(15mL)中的混合物用AcOH(125μL，2.19mmol)处理并回流2小时。在冷却至室温后，加入4d(110mg，0.35mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)并且将该反应混合物回流5小时。蒸发溶剂，用乙酸乙酯稀释残余物，用水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过柱色谱(硅胶60，乙酸乙酯，Rf＝0.38)纯化残余物以留下为无色油状咪唑。将其溶解在CH2Cl2(5mL)中并且用二噁烷(1mL)中的3MHCl处理。在搅拌5min后，蒸发溶剂并且使残余物从CH2Cl2/己烷中结晶。产量：60mg(37％)；mp 85-86℃的灰白色固体；vmax(ATR)/cm-1 3011，2940，2841，2605，1627，1590，1552，1520，1499，1464，1443，1421，1400，1307，1275，1239，1208，1181，1147，1136，1105，1023，994，894，864，809，762，730，694；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.65(3H，s)，3.82(3H，s)，3.83(3H，s)，3.84(3H，s)，7.1-7.4(5H，m)，9.23(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)δ33.9，56.1，56.5，60.3，114.3，114.5，114.8，115.3，117.2，123.1，123.9，126.5，127.8，135.7，147.1，149.5，152.7，153.8；m/z(EI)422(92)[M+，游离碱]，420(92)[M+]，407(24)，405(23)。
43)1-甲基-4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-5-(3，5-二溴-4-甲氧基苯基)-咪唑×HCl 9b
将3，5-二溴-4-甲氧基苯甲醛(103mg，0.35mmol)和33％MeNH2/乙醇(220μL，1.78mmol)在乙醇(15mL)中的混合物用AcOH(125μL，2.19mmol)处理并回流2小时。在冷却至室温后，加入4d(110mg，0.35mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)并且将该反应混合物回流5小时。蒸发溶剂，用乙酸乙酯稀释残余物，用水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过柱色谱(硅胶60，乙酸乙酯/甲醇9∶1，Rf＝0.6)纯化残余物以给出为无色油状物的咪唑。将这种油状物溶解在CH2Cl2(5mL)中并且用二噁烷(1mL)中的3M HCl处理。在搅拌5min后，蒸发溶剂并且使残余物从CH2Cl2/己烷中结晶。产量：90mg(51％)；mp 125-130℃的无色固体；vmax(ATR)/cm-13380，3123，3011，2940，2841，2610，1628，1585，1551，1522，1494，1463，1442，1411，1307，1278，1258，1208，1163，1137，1106，1021，988，877，814，754，723；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.65(3H，s)，3.84(3H，s)，3.89(3H，s)，7.0-7.1(1H，m)，7.23(1H，t，JHF＝17.7Hz)，7.32(1H，dd，J＝12.5Hz，2.2Hz)，7.86(2H，s)，9.19(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)δ33.9，56.1，60.6，114.3，114.7，115.0，118.2，124.1，125.2，126.2，135.2，136.1，147.8，149.5，152.8，154.9；m/z(EI)472(52)[M+，游离碱]，470(100)[M+，游离碱]，468(28)[M+，游离碱]，455(19)，330(19)，36(40)。
44)1-甲基-4-(3-氟-4-甲氧基苯基)-5-(3，5-二碘-4-甲氧基苯基)-咪唑×HCl 9c
将3，5-二碘-4-甲氧基苯甲醛(160mg，0.41mmol)和33％MeNH2/乙醇(260μL，2.10mmol)在乙醇(15mL)中的混合物用AcOH(150μL，2.63mmol)处理并回流2小时。在冷却至室温后，加入4d(150mg，0.47mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)并且将该反应混合物回流5小时。蒸发溶剂，用乙酸乙酯稀释残余物，用水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并且在真空中浓缩。通过柱色谱(硅胶60，乙酸乙酯，Rf＝0.48)纯化残余物提供为无色油状物的咪唑。将这种油状物溶解在CH2Cl2(5mL)中并且用二噁烷(1mL)中的3M HCl处理。在搅拌5min后，蒸发溶剂并且使残余物从CH2Cl2/己烷中结晶。产量：60mg(25％)；mp 207-210℃(dec.)的灰白色固体；vmax(ATR)/cm-1 3111，3055，3003，2928，2841，2627，1633，1571，1549，1519，1491，1469，1443，1393，1337，1309，1280，1258，1208，1183，1149，1106，1068，1016，991，894，875，863，814，767，741，696；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ3.62(3H，s)，3.83(3H，s)，3.84(3H，s)，7.0-7.1(1H，m)，7.2-7.3(2H，m)，7.98(2H，s)，9.11(1H，s)；13C NMR(75.5MHz，DMSO-d6)δ34.4，56.8，60.9，92.8，114.9，115.0，115.2，115.5，124.4，124.5，126.6，136.6，142.3，148.1，150.0，160.4；m/z(EI)564(100)[M+，游离碱]，549(33)。
实施例3：生物学测定
对作为本发明的代表化合物的1-甲基-5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-4-(3-氯-4，5-二甲氧基苯基)-咪唑(“5b”)进行体外和体内测定，如以下所述。
对于生物测试，将化合物5b溶解在生理盐水溶液中。可达到高至10mM的浓度从而显示良好的溶解度。习惯上，对动物的体内应用仅需要高达3mM的浓度。为了检查这种5b溶液的化学稳定性，将其储存一个月并随后与新鲜制备的相同浓度的5b溶液一起在体外测试中使用。
使用微管蛋白聚合测定试剂盒(Tubulin Polymerization Assay Kit，Cytoskeleton，USA)根据制造商的说明书进行微管蛋白聚合的分析。该测定是基于荧光的测定且微管蛋白聚合之后是使用以下滤光片在SpectraFluorPlus(Tecan，Switzerland)上测量RFU(相对荧光单位)：激发360nm，发射465nm。
通过标准比色测试(SRB-测定和MTT测定)确定5b对不同实体的各种肿瘤细胞系的细胞毒活性。对于SRB细胞毒性测定，使用确定磺基罗丹明-B(SRB)微量培养比色测定(Papazisis等人Optimization of thesulforhodamine B colorimetric assay.J.Immunol.Methods 1997，208，151-158)并如在Müller等人Failure of activation of caspase-9induces a higherthreshold for apoptosis and cisplatin resistance in testicular cancer.Cancer Res.2003，63，513-521中所述那样进行来确定暴露于0.001-10μM药物浓度的睾丸生殖细胞肿瘤细胞系的剂量响应曲线。简言之，在第0天将细胞以之前确定的确保在实验期间指数细胞生长的细胞密度接种到96孔板。在第1天，用溶解在培养基中以给出适当的浓度的药物处理细胞持续指示的时间，并且在第5天确定存活细胞相对于未处理的对照的百分比。
用于抑制微管蛋白的聚合和用于细胞毒性的测定揭示了5b的高的、未减弱的活性和效力，如图1和图2所示。
与顺铂不同，化合物5b显示相似的针对两种生殖细胞肿瘤细胞系H12.1和1411HP的体外活性，其IC50(96h)≈30-50nM，即，其克服了1411HP细胞的化学耐受性(图3A)。这表明化合物5b通过不同的作用机制起作用，在多药耐药肿瘤细胞中启动生长抑制以及还有细胞死亡。比较结果可以例如用根据本发明的化合物6b获得(图3B)。
采用无胸腺的裸-Fox n1 nu/nu小鼠(Harlan und Winkelmann，Borchen，Germany)在耐药性生殖细胞肿瘤细胞系1411HP的裸小鼠异种移植模型中研究本发明的化合物5b和6b的体内抗肿瘤活性和耐受性。
在测试化合物5b之前，用上升的5b剂量范围处理这种类型的健康动物以确定毒性特征(toxicity profile)。小鼠对该化合物十分耐受，甚至是在相对高的浓度下。然后在另外的测试中在一对生殖细胞肿瘤细胞系(化学耐受细胞系1411HP和化学敏感细胞系H12.1)的裸小鼠异种移植模型中施用适宜的剂量。这些细胞系当作为异种移植肿瘤生长时保留了其对顺铂的个体体外化学敏感性，所以可用作对化学治疗的耐受性的临床状况的模型(Mueller等人Cancer Res.2003；Mueller等人Tumor Biol.2006)。尽管用顺铂处理带有H12.1异种移植物的小鼠导致完全消退，1411HP异种移植物仅遭受暂时的生长抑制，随后肿瘤重新发展。
如下进行这些测试。将小鼠饲养在无病原体的条件下，饲喂高压灭菌的标准饮食且给予自由饮用无菌水。向五只小鼠中的每一只施用1千万个1411HP细胞的150μL磷酸盐缓冲盐水悬浮液到左胁腹中以产生皮下异种移植物肿瘤。4周后将带有约1cm3体积的1411HP异种移植物的两只小鼠的一个组分别腹膜内注射单剂量的30mg/kg体重的5b或6b。将具有约2.5cm3体积的异种移植物的第二组中的两只小鼠连续两天腹膜内注射20mg/kg体重的5b。使用公式a2×b×0.5(其中a是短尺寸而b是长尺寸)通过测径器测量计算肿瘤体积。每周评估体重两次，在处于治疗之下时每天评估一次。
带有约1cm3体积的1411HP异种移植物的两只小鼠用单剂量的30mg/kg体重的5b或6b处理后，在任一个例子中，强烈的肿瘤内出血在24小时后仍可见，为红色-蓝色到棕色变色，如用5b处理的图5所示。还可见短暂的肿瘤肿胀，最终跟着消退和缓慢再生，如图4A所示。两只小鼠均十分耐受这种处理。在带有约2.5cm3体积的1411HP肿瘤移植物的两只小鼠中通过连续两天施用20mg/kg体重的5b实现了延长的肿瘤缩小时间。所得的显著的肿瘤消退，最终导致在一个例子中的稳定，如图4B/C所示。另一个异种移植物重新生长并且在第16/17天和35/36天被给予另外两个双倍剂量的5b。如图4C所示，实现了在三次应用的每一次后的消退和延长的稳定时间。值得注意的是，即使是第三个疗程也被良好地耐受，且小鼠到这次重新获得其初始体重。这些数据表明化合物5b和6b对于耐药肿瘤的有效的治愈性治疗的巨大潜力。
因此，在该小鼠模型中，5b的抗肿瘤活性通过耐药肿瘤的显著消退而变得明显(图4)。通过在施用化合物5b后24小时发生的明显肿瘤内出血显示并且可见选择性影响肿瘤血管的强烈的血管破坏作用(图5)。此外，化合物5b的单剂量施用足以使肿瘤体积稳定约两周。
此外，在1411HP生殖细胞肿瘤异种移植物中使用双剂量腹膜内应用2×20mg/kg体重的化合物6b的肿瘤消退试验显示与化合物5b相似程度的高的抗肿瘤活性，如还在图10中所示的。
从这些发现可得出结论：式(I)的化合物诸如，例如化合物5b或6b代表一类适于治疗多药耐药肿瘤的有效药物。它们的特点是基于真性机制(genuine mechanism)的高的癌细胞特异性细胞毒性、肿瘤选择性血管破坏作用、有利的生理学特性和优异的体内耐受性的协同联合。
在1411HP异种移植物模型中进一步测试化合物5f、6b和6f的血管破坏作用，且在A2780卵巢癌异种移植物的第二肿瘤模型中另外测试化合物5b、5f、6b和6f，显示所有化合物在两个模型中的血管破坏活性(图11)，这表明本发明的化合物在血管化良好的肿瘤中的一般活性。
还在口服施用的可行性方面测试了化合物5b、6b和6f。小鼠分别接受单剂量的40mg/kg体重的5b、6b或6f。没有观察到毒性体征。然后根据用于消退试验的腹膜内处理方案但用2倍高剂量的2x40mg/kg体重，连续两天以双剂量口服给予化合物6b或6f。这被良好地耐受且仅在6b的例子中引起短暂且最低限度的体重损失，而对于6f没有观察到毒性体征。此外，6f以单剂量的60mg/kg体重施用并且同样被无症状地耐受。这表明本发明的化合物甚至以更高剂量口服给予时杰出的毒性特征。
为了证实在口服施用本发明的化合物后是否也实现肿瘤靶向的细胞毒活性，在口服给予60mg/kg体重的化合物6b后24小时研究了血管破坏作用。没有观察到毒性体征。血管破坏作用与腹膜内应用后所见的血管破坏作用发生的程度相同，如还在图12中所示。
实施例4：在各种人肿瘤细胞系中的细胞生长抑制测定
评估了根据本发明的化合物5b、6b、8a和8e以及参考化合物25f(Wang等人，J.Med.Chem.2002，45，1697-1711)对以下的人肿瘤细胞系的细胞的作用：518A2黑色素瘤、HL-60白血病、HT-29结肠癌、KB-V1/Vbl宫颈癌和MCF-7/Topo乳腺癌。
Figure BDA00002701598500571
HL-60细胞从德国生物材料保藏中心(German Collection of BiologicalMaterial，DSMZ)，Braunschweig，Germany获得；人518A2黑色素瘤细胞以及睾丸生殖细胞肿瘤细胞系H12.1和1411HP培养在德国哈雷的马丁-路德大学医学院的肿瘤学和血液学系(the department of oncology andhematology，Medical Faculty of the Martin-Luther University，Halle，Germany)；KBV1/Vbl和MCF-7/Topo细胞从德国雷根斯堡大学药学研究所(Institute of Pharmacy of the University Regensburg，Germany)获得；且结肠HT-29细胞来自德国埃朗根大学医院(University Hospital Erlangen，Germany)。HL-60和HT-29细胞生长在补充10％胎牛血清(FCS)、100IU/mL青霉素G、100μg/mL硫酸链霉素、0.25μg/mL两性霉素B和250μg/mL庆大霉素(均来自Gibco，Egenstein，Germany)的RPMI-1640培养基中。518A2和KB-V1/Vbl细胞培养在包含10％FCS、100IU/mL青霉素G、100μg/mL硫酸链霉素、0.25μg/mL两性霉素B和250μg/mL庆大霉素的达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(D-MEM，Gibco)中。MCF-7/Topo细胞生长在补充2.2g/L NaHCO3、110mg/L丙酮酸钠和5％FCS的E-MEM培养基(Sigma)中。将细胞保持在37℃湿气饱和气氛(5％CO2)下的75-mL培养瓶(Nunc，Wiesbaden，Germany)中。在通过0.05％胰蛋白酶/0.02％EDTA(PAAlaboratories，，Germany)的胰蛋白酶消化后将细胞连续传代。常规监测支原体污染，且只使用无支原体的培养物。
使用MTT[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-溴化二苯基四氮唑](ABCR)来识别活力细胞，活力细胞将其还原为紫色甲臜(formazan，Mosmann，J.Immunol.Methods1983，65，55-63)。HL-60白血病细胞(5×105/mL)和518A2黑色素瘤，HT-29结肠癌，KB-V1/Vbl宫颈癌和MCF-7/Topo乳腺癌的细胞(5×104/mL)接种在96孔组织培养板中并培养24小时。在用测试化合物处理后将细胞孵育(5％CO2，95％湿度，37℃)持续24、48或72小时。将空白和溶剂对照相同处理。将磷酸盐缓冲盐水中的MTT(5mg/mL)添加至0.05％(HL-60、518A2)或0.1％(HT-29、KB-V1/Vbl、MCF-7/Topo)的终浓度。在HL-60细胞的实例中，2小时后甲臜(formazan)沉淀溶解包含0.6％乙酸的在DMSO中的10％十二烷基硫酸钠中。对于粘附的518A2、KB-V1/Vbl、MCF-7/Topo和HT-29细胞，在加入溶剂混合物之前迅速翻转微孔板以弃去培养基。在黑暗中轻柔地摇动微孔板30min并用ELISA读板器测量570nm和630nm(背景)的吸光度。所有实验以一式四份进行；将活力细胞的百分比计算为平均值±SD，其中将对照设定为100％。
如图6A所示，甚至在考布他汀A-4耐受的HT-29细胞核Pgp过表达的KB-V1细胞中，以单位数纳摩尔范围内的IC50浓度，卤素-氨基取代的咪唑5b和6b明显比已知参考化合物25f的细胞毒性大。仅在MCF-7/Topo细胞中它们的活性显著变小但仍优于已知的咪唑25f。
相比之下，二氨基取代的噁唑8a及其咪唑对应物8e具有针对多药耐药细胞即KB-V1/Vbl(Pgp+)和MCF-7/Topo(BCRP+)的更大的细胞系特异性，具有比25f和5b/6b更大的效力。这暗示这些化合物可能不同的或另外的作用方式。
而且，如图7所示，考布他汀A-4在多药耐药的HT-29结肠癌细胞中显示比化合物5b和6b更低的细胞毒性。所以，化合物5b和6b能够在体外在这些癌细胞中克服药物耐受性。
在一组肿瘤细胞系(H12.1生殖细胞肿瘤、1411HP生殖细胞肿瘤、A2780卵巢癌、HT29结肠癌、DLD1结肠癌、HCT8结肠癌)中对化合物5b、6b、5f和6f以及参考化合物25f(Wang等人)另外进行SRB细胞毒性测定。如图13所示，化合物5b和6b与化合物25f相比显示优异的活性，并且对于化合物5f和6f观察到进一步的细胞毒性改进。
以类似的方式测试化合物9a、9b和9c(其是根据本发明的式(III)的示例性化合物)以及参考化合物25f。如表1所示，与参考化合物25f相比，化合物9a、9b和9c显示对肿瘤细胞(L929成纤维细胞、KB-3-1宫颈癌和PC-3前列腺癌)比对非恶性细胞(PtK-2负鼠肾细胞和NHDF成纤维细胞)更明显且选择性更强的细胞毒性作用，以及改进的对HUVEC细胞的作用(MIC)。
Figure BDA00002701598500591
表1：在L929成纤维细胞、KB-3-1宫颈癌、PC-3前列腺癌、PtK-2负鼠肾细胞和NHDF成纤维细胞中的IC50(nM)，以及在HUVEC细胞中的最小抑制浓度(MIC)(nM)。
实施例5：活性氧簇(ROS)产生测定
活性氧簇(ROS)在肿瘤细胞中的产生是导致细胞组分诸如DNA、脂质或蛋白的严重损伤的细胞应激的征兆。使用四氮唑蓝比色(NBT)测定(Rook等人J.Immunol.Methods 1985，82，161-167)评定了用参考化合物25f或根据本发明的化合物处理的HL-60和518A2细胞中产生的ROS的量。在使518A2细胞和HL-60细胞24小时暴露于50μM的测试化合物24h之后从相对于未处理的对照(1％)的甲臜(formazan)的百分比吸光度确定ROS产生(％NBT还原)。
对于NBT测定，将HL-60细胞(0.5·106/mL)铺板到96孔组织培养板中，并且在37℃孵育24小时后加入测试化合物达到50μM的终浓度。在用测试化合物处理后细胞的孵育(5％CO2，95％湿度，37℃)持续24小时。在通过离心除去细胞培养基后，将每个孔中的细胞重悬在100μL 0.1％NBT中，并且将板放在培养箱中1小时。用100μl 2M KOH和130μl DMSO溶解还原的NBT持续30min。使用ELISA读板器在630和405nm(背景)测量每个孔的吸光度。将粘附的518A2细胞(0.5·104/mL)在胰蛋白酶消化且在37℃孵育24小时后接种到96孔组织培养板中使之贴附，然后类似地处理，仅在用NBT孵育4小时之前除去培养基。所有实验一式四份地进行。
获得了以下结果，指示的值代表四个独立实验的平均值±标准偏差：
Figure BDA00002701598500601
微弱细胞毒性的化合物25f导致低ROS水平，而例如根据本发明的高细胞毒性化合物5b提供4.4％的ROS水平。
实施例6：线粒体膜测定
借助检测线粒体膜电位的变化的荧光染料JC-1确定518A2和HL-60细胞中的凋亡相关的线粒体损伤的程度(Desager等人J.Cell.Biol.1999，144，891-901)。
用线粒体膜检测试剂盒(Stratagene，La Jolla，CA，USA)确定在518A2和HL-60细胞暴露于5μM的测试化合物(即根据本发明的化合物或参考化合物25f)72小时后，相对于未处理的对照(100％)红色荧光与绿色荧光的比值。值代表四个独立实验的平均值±标准偏差。
通过线粒体膜检测试剂盒(Stratagene，La Jolla，CA，USA)根据制造商的步骤确定线粒体膜电位的变化。用5μM的测试化合物处理后72小时，将细胞样品以400g离心5min。将沉淀重悬在500μL稀释的JC-1溶液中，在37℃孵育15min(HL-60)然后以400g再次离心5min。在洗涤后，将沉淀重悬在100μL PBS中并转移到黑色96孔板的孔中。测量红色(λex＝585nm，λem＝590nm)和绿色(λex＝510nm，λem＝527nm)荧光强度并计算其比值。
再一次，测试化合物的影响在HL-60白血病细胞中更为不同和特异：
Figure BDA00002701598500611
所以，在用细胞毒性更强的化合物5b孵育后仅有约65％的线粒体是完整的，而用25f处理使更多线粒体未受影响(74％)。
实施例7：TdT介导的dUTP切口端标记(TUNEL)测定
在允许通过用荧光素标签的核苷酸给DNA片段的3’-OH端标记来检测凋亡的TUNEL测定中，发现化合物5b、6b和8a主要以凋亡方式诱导HL-60细胞死亡(在用10μM药物孵育16小时后约60％)。借助检测线粒体膜电位的变化的荧光染料JC-1确定HL-60细胞中的凋亡相关的线粒体损伤的程度(Desager等人J.Cell.Biol.1999，144，891-901)。在用细胞毒性更强的化合物5b-d、6b-d和8a/e孵育后仅有约60％的线粒体是完整的，而用参考化合物25f处理使74％线粒体未受影响。图8中显示了用化合物5b、6b或8a孵育后在TUNEL测定中测试的HL-60细胞的显微镜成像。
使用改良的由Jobmann描述的TdT介导的dUTP切口端标记(TUNEL；Roche)测定(Jobmann，M.Apoptose bei strukturellen Herzmuskelerkrankungen.Ph.D.Thesis，University Marburg，Germany 2002，31)。将HL-60细胞用测试化合物孵育16小时，抽取3×106细胞的等份并且在200μL PBS中洗涤/离心3次。通过悬浮在200μL新鲜制备的PBS中的2％福尔马林溶液中将细胞在室温下固定10min。在用2×200μL PBS洗涤后，将10μL的细胞悬浮液施加到显微镜载玻片上并且在室温下风干。通过用PBS覆盖5min洗涤细胞并用冰上的0.1％Triton X-100在0.1％柠檬酸钠中的溶液处理2min。在用PBS洗涤两次后，将10μL新鲜制备的TUNEL反应混合物(由1μL TUNEL酶溶液和9μL TUNEL标记溶液组成)滴在细胞上，然后覆盖细胞并且在37℃下在黑暗中孵育(5％CO2，95％湿度)45min。用PBS洗涤细胞三次，然后通过荧光显微镜以450-500nm的激发波长分析。对300个细胞计数并计算凋亡的TUNEL阳性的绿色染色的细胞的百分比并将其表示为三个独立实验的平均值±S.D.。
实施例8：CAM测定
使用CAM测定测试本发明的化合物的抗血管生成和血管破坏特性。在这个测试中，使用无菌鸡胚的血管系统用作模型(Wilting等人，Anat.Embryol.1991，183，259-271)。
将生出后直接从附近农场收到的受精鸡蛋以36-38℃的温度和60％的相对湿度孵育。在生长过程中，将鸡蛋保持在下倾的位置中并不时转动以避免粘附于壳。四天后将每个胚转移到通过在杯子顶固定薄塑料箔而产生的腔中并覆盖。这通过在气囊所在的平端开壳并使内容物滑出来完成。在那里继续生长另外2-4天直到第一个血管变得可见。然后将10nmol的待测试物质(在具有1％DMF的10μL PBS中)直接施加在胚胎血管上。使用PBS作为参照。最后孵育持续多达另外三天(Dugan等人，Anat.Rec.1991，229，125-128；Fisher，Tested studies for laboratory teaching 1993，5，105-115)。
图9中显示了相比于阴性对照(PBS)，化合物CA-4(参考)和5b对胚胎血管发育的作用。像CA-4一样，化合物5b在处理后24小时内导致显著的血管缩小，并且导致血管系统在三天内完全退化。
实施例9：管形成测定
已确定根据本发明的化合物5b、6b和8a以及参考化合物25f(Wang等人，J.Med.Chem.2002，45，1697-1711)对基质胶上的HUVEC细胞中的毛细管形成的作用，以进一步评估这些化合物的抗血管形成特性(所采用的化合物的结构显示在实施例4中)。
将35μL的培养基∶基质胶(1∶1)加入到96孔板的孔中，并且在37℃孵育30分钟。将胰蛋白酶消化的HUVEC细胞悬浮液调节为800.000个细胞/mL。在另一个96孔板中，用25μL的培养基连续稀释25μL的化合物储液。将25μL的化合物稀释液和25μL的细胞悬浮液加入到基质胶涂布的96孔板中并过夜孵育细胞。作为阴性对照，使用甲醇代替化合物稀释液。
化合物6b和8a在非常低的浓度(7.72ng/mL)显示明显的HUVEC细胞管形成的抑制，而化合物5b在这个浓度没有产生相应的强烈抑制，如还在图14中所示。化合物6b和8a具有明显强于已知化合物25f的活性，化合物25f在高得多的浓度(130ng/mL)抑制管形成。
实施例10：高内涵分析
化合物6b和8a在PtK-2细胞中的基于自动显微术的聚类分析(高内涵分析，HCA)揭示了化合物6b的与已知的微管蛋白粘合剂长春碱的密切关系以及化合物8a的与已知的PI3激酶抑制剂LY294002的密切关系。结果显示在图15中。
仪器：ImageXpress Micro(IXM)高速激光自动聚焦(High-Speed LaserAutofocus)
CCD数码相机
300瓦特氙弧灯
滤光片设置：-DAPI
-FITC
-TRITC
-德克萨斯红
Nikon物镜：-4×Plan Apo，NA 0,20
-10×S Fluor，NA0,50
-20×S Fluor，NA0,75
-40×PlanApo，NA0,95
-60×Plan Fluor，NA 0,85
软件：-MetaXpress
-AcuityXpress
参数(染料-/抗体测定)：＞50，在模块中组织，例如使用DAPI(W1)、FITC(W2)和TRITC(W3)染色和滤光片的MWCS模块。
MWCS模块的描述符：
基于图像的分析：总细胞，(％)阳性W2/W3，评分特征(scoringprofile)1--/12-/1-3/123。表现仅在波长1和2染色而在波长3不染色(12-)的细胞绝对数目
基于细胞的分析：总区域(细胞核区域)，染色区域W1/W2/W3(对于单个染料的染色区域)，阳性W2/W3(在每个波长的染色细胞的绝对数目)；平均强度/积分强度(integrated intensity)W1/W2/W3
参考化合物：62
细胞系：PtK2(非恶性)，KB-3-1宫颈癌，A-498肾癌

Claims (17)

1.一种式(I)的化合物
Figure FDA00002701598400011
其中：
X选自O、S、N(H)、或N(C1-4烷基)；
R1选自卤素、-CN、-CF3、-NH2、-NH(C1-4烷基)、或-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)；
R2选自氢、卤素、-CN、-CF3、-OH、-O(C1-4烷基)、-NH2、-NH(C1-4烷基)、或-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)；
R3选自-OH、-O(C1-4烷基)、-SH、-S(C1-4烷基)、-NH2、-NH(C1-4烷基)、或-N(C1-4烷基)(C1-4烷基)；
或者，可选地，R2和R3共同形成基团-C(卤素)＝CH-N(CH3)-；或其药学上可接受的盐、溶剂合物、或前体药物。
2.如权利要求1所述的化合物，其中R1选自-Cl、-Br、或-NH2。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其中R2选自氢、卤素、-OH、或-NH2。
4.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R3选自-O-CH3、-O-CH2-CH3、或-N(CH3)2。
5.如权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中R3选自-O-CH3或-N(CH3)2。
6.如权利要求1或2所述的化合物，其中R2和R3共同形成基团-C(Cl)＝CH-N(CH3)-。
7.如权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中X选自O和N(CH3)。
8.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自1-甲基-5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-4-(3-氯-4，5-二甲氧基苯基)-咪唑、1-甲基-5-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-4-(3-溴-4，5-二甲氧基苯基)-咪唑、1-甲基-5-(3-氨基-4-乙氧基苯基)-4-(3-氯-4，5-二甲氧基苯基)-咪唑或1-甲基-5-(3-氨基-4-乙氧基苯基)-4-(3-溴-4，5-二甲氧基苯基)-咪唑，或其药学上可接受的盐、溶剂合物、或前体药物。
9.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自1-甲基-4-(3-氯-4，5-二甲氧基苯基)-5-(3-氟-4-乙氧基苯基)-咪唑或1-甲基-4-(3-溴-4，5-二甲氧基苯基)-5-(3-氟-4-乙氧基苯基)-咪唑，或其药学上可接受的盐、溶剂合物、或前体药物。
10.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自1-甲基-4-(3-氨基-4，5-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3-氯吲哚-5-基)-咪唑、1-甲基-4-(3-氯-4，5-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3-氯吲哚-5-基)-咪唑或1-甲基-4-(3-溴-4，5-二甲氧基苯基)-5-(N-甲基-3-氯吲哚-5-基)-咪唑，或其药学上可接受的盐、溶剂合物、或前体药物。
11.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至10中任一项所述的化合物和药学上可接受的赋形剂。
12.如权利要求1至10中任一项所述的化合物或权利要求11所述的药物组合物，其用于治疗或预防癌症。
13.一种治疗或预防癌症的方法，包括向有此需要的受治疗者施用权利要求1至10中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、或前体药物。
14.如权利要求12所述的化合物、权利要求12所述的药物组合物或权利要求13所述的方法，其中所述癌症选自乳腺癌、泌尿生殖系癌、肺癌、胃肠癌、表皮样癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰腺癌、成神经细胞瘤、头和/或颈癌、膀胱癌、肾癌、脑癌、白血病或淋巴瘤。
15.如权利要求12或14所述的化合物、权利要求12或14所述的药物组合物或权利要求13或14所述的方法，其中所述癌症是多药耐药癌症。
16.如权利要求12、14或15所述的化合物、权利要求12、14或15所述的药物组合物或权利要求13、14或15所述的方法，其中所述癌症是对考布他汀A-4和/或顺铂耐受的。
17.如权利要求12、14、15或16中任一项所述的化合物、权利要求12、14、15或16中任一项所述的药物组合物或权利要求13至16中任一项所述方法，由此所述化合物或药物组合物将与抗增殖药物、抗癌药物、细胞稳定药、细胞毒药物和/或放射治疗联合施用。
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