CN101503373A - 2-氨基-1-(4-硝基苯基)-1-乙醇类金属蛋白酶抑制剂及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种2－氨基－1－(4－硝基苯基)－1－乙醇类金属蛋白酶抑制剂及其制备方法和应用，是具有如下通式(I)的化合物。这些不同系列的类二肽或类三肽化合物，有望增强化合物与酶或受体的亲和力以及代谢稳定性，符合抑制剂结构的基本要求。本发明设计合成了一组全新结构的氨肽酶N抑制剂。体外试验表明其无细胞毒活性，并且有4个化合物但体现出显著的体外抑酶活性接近阳性对照药物bestatin，有望成为抗癌候选药物。本发明还涉及含有式(I)结构类肽化合物的药物组合物及其制药用途。
Description
技术领域
本发明涉及一类具有抑制金属蛋白酶作用的类肽化合物及其制备方法、活性试验和含该类肽化合物的组合物，以及这些组合物的用途。属药物合成领域。
背景技术
1、氨肽酶N
氨肽酶N(APN，CD13)是一族II型膜结合糖蛋白，分子量约为150Kd，属于锌离子依赖性金属蛋白酶和氨肽酶M1家族的Gluzincins亚族，以同源二聚体的形式存在于细胞膜，参与底物N端氨基酸的降解。APN广泛表达于肾脏和肠刷状缘细胞、骨髓始祖细胞膜、单核细胞膜，中枢神经系统突触细胞膜、成纤维细胞、内皮细胞膜、胎盘细胞膜表面，参与机体的生理调节。
研究证明，APN在肿瘤发生、免疫功能调节以及病毒感染中发挥重要的作用。
1)APN能降解细胞外基质(ECM)的主要成分，并作为一个新型信号转导分子参与肿瘤新血管的生成，从而促进肿瘤细胞浸润与转移(Sato Y，Biol.Pharm.Bull.，2004，27(6)：772-776；2)APN参与T淋巴细胞依赖的炎症反应，能够表达于抗原递呈细胞表面，降解免疫活性物质(如白介素-8)；还降低了T细胞对其抗原的识别能力，同时削弱了巨噬细胞和NK细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤能力，使机体免疫力下降。3)APN作为人冠状病毒HCoV-229E和传染性胃肠炎病毒(TGEV)表面的受体，在上呼吸道感染(如：SARS)和急性肠炎中扮演重要角色。(Delmas，B.，et al.Nature，1992，357,417；Yeager，C.L.；et al.Nature，1992，357,420)。4)APN通过降解能够使HIV-1辅助受体CCR5脱敏的趋化因子fMLP，从而降低细胞的天然免疫功能，并使CCR5增敏，促进HIV-1病毒进入宿主细胞。(Shen W，Li B，et al.Blood，2000，96(8)，2887；Shipp MA，et al.Blood，1993，82(4)，1052)。5)APN参与内源性镇痛物质内啡肽和脑啡肽的降解，从而引起P物质的过度释放，导致疼痛。6)APN降解血管紧张素，参与机体血压的调节(Mitsui，T.；et al.Biol.Pharm.Bull.，2004，27,768.)。
2、基质金属蛋白酶(MMPs)
MMPs是一类依赖钙离子和锌离子的内肽酶，对细胞外基质降解、组织重建以及细胞间多种可溶性因子的调控起重要作用。MMPs的活性由基因表达水平和酶原激活/抑制因子的分泌水平严格控制，在很多病理过程，如关节炎、组织溃烂、恶性肿瘤的生长和转移中，MMPs也起到了重要作用。
目前在哺乳动物中发现了MMPs家族的28个成员(Szabo，K.A.etal.Clinical and AppliedImmunology Reviews.2004，4，295)，根据其结构、特异性底物和不同的细胞位置，分为不同的亚型，包括种胶原酶(MMP-1，-8，-13，-18)，2种明胶酶(MMP-2，-9)，3种基质降解酶(MMP-3，-10，-11)，6种膜型-基质金属蛋白酶(MMP-14，-15，-16，-17，-24，-25)，以及其他未归类的如基质溶解素(MMP-7和-26)和巨噬细胞金属弹性蛋白(MMP-12)等。其中明胶酶(MMP-2和-9)已被证明于侵袭性肿瘤的恶性表型及癌症病人的不良预后密切相关，他们参与了肿瘤细胞对基底膜、基质的侵袭，对血管壁的穿透，以及肿瘤细胞的转移。近年来研究表明，MMPs还与原发瘤和继发瘤的生长、以及血管生成有关，甚至对肿瘤增值过程亦起促进作用。
研究表明，MMPs和APN与恶性肿瘤的浸润与转移的发生和发展密切相关(Sounni N.E.，Janssen M.，Foidart J.M.，et al..Matrix Biol.，2003，22(1)，55-61)。二者均以细胞外基质的主要成分—胶原蛋白为底物，通过破坏机体对肿瘤细胞的天然屏障，导致肿瘤细胞的浸润与转移。然而二者的不同在于其对底物的降解位点不同：前者为内肽酶(endopeptidase)，能够从肽段中间降解底物；后者为外肽酶(ectopeptidase)，其特点是由底物末端氨基开始降解底物。因此，瞄准以这两种酶为作用靶点的来设计抑制剂成为肿瘤药物治疗研究中的热点。本发明将MMPs和APN结合起来研究，本项专利中涉及所设计的类肽化合物对两者的选择性问题，而且通过对类肽化合物结构的优化有望分别开发出特异性选择性抑制剂。本发明中所设计的类肽化合物针对于APN活性筛选发现几个药物分子其活性微弱于目前唯一上市的乌苯美司。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种2，3-二氨基-1-(4-硝基苯基)-1-丙醇类金属蛋白酶抑制剂及其制备方法和用途。
“基质金属蛋白酶”的英文缩写为“MMPs”，氨肽酶N的英文缩写为“APN”，为表达简洁以下均以MMPs表示基质金属蛋白酶，以APN表示氨肽酶N，APNi表示氨肽酶N抑制剂。
本发明的技术方案是：
1.本发明提供一种2-氨基-1-(4-硝基苯基)-1-乙醇类金属蛋白酶抑制剂。其结构为具有如下通式(I)的类肽化合物，以及其光学异构体、非对映异构体和消旋体混合物，其药学上可接受的盐，溶剂合物或前药。
其中，W为C(O)NH或CH2NHC(O)；
R1是芳基，杂芳基，芳基C1-6烷基，杂芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，杂芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，杂芳基C2-6炔基或C1-6烷基，任选被一个或多个如下基团取代：羟基，卤素，硝基，氰基，芳基，取代芳基，卤C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基或芳基C1-8烷氧羰基；
R2是氢，芳基，杂芳基，芳基C1-6烷基，杂芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，杂芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基或杂芳基C2-6炔基，任选被一个或多个如下基团取代：卤素，硝基，氰基，卤C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基或C1-8烷氧羰基；
式(I)中*所示的碳具有(1S，2R)构型，或者具有(1R，2S)构型。
优选的R1是芳基C1-6烷基，优选苄基，β芳乙基，γ芳丙基，C端保护或未保护天然或非天然氨基酸衍生物，任选被一个或多个如下基团取代：羟基，卤素，硝基，氰基，C1-8烷氧基；R2是氢。
优选的，上述的类肽化合物(I)是下列之一：
(2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)-N-丙基丙酰胺(5a)、
(2R，3S)-2-氨基-3-羟基-N-异丙基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5b)、
(2R，3S)-2-氨基-N-丁基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5c)、
(2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)-N-戊基丙酰胺(5d)、
(2R，3S)-2-氨基-N-环己基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5e)、
(2R，3S)-2-氨基-N-苄基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙胺(5f)、
(2R，3S)-2-氨基-N-(4-氟苄基)-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5g)、
(2R，3S)-2-氨基-N-(4-甲氧基苄基)-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5h)、
(2R，3S)-2-氨基-N-(苯乙基)-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5i)、
(2R，3S)-2-氨基-N-(2-氯苯乙基)-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5j)、
(2R，3S)-2-氨基-N-(2-羟基苯乙基)-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5k)、
(2R，3S)-2-氨基-3-羟基-N-((S)1-羟基-3-苯丙基-2-基)-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(51)、
(2R，3S)-2-氨基-3-羟基-N-((S)1-羟基-3-苯丙基-2-基)-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5m)、
(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙胺)-4-甲基戊酸(5n)、
(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺)-3-苯丙酸(5o)、
(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺)-3-甲基丁酸(5p)、
(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺)-3-甲基丁酸(5q)、
(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺)-3-(1H-吲哚-2-基)丙酸(5r)、
(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺)-N-羟基-4-甲基戊酰胺(7n)、
(2R，3S)-2-氨基-3-羟基-N-((S)-1-(羟氨基)-1-氧-3-苯丙烷-2-基)-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(7o)、
(S)-2-((S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺)-4-甲基戊酰胺)-3-苯丙酸(5s)、
(S)-2-((S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰氨)-3-苯丙酰氨)-3-苯丙氨酸(5t)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)苯甲酰胺(12a)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-2-甲基苯甲酰胺(12b)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-2-氯苯甲酰胺(12c)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-2-氯苯甲酰胺(12d)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-4-硝基苯甲酰胺(12e)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-4-甲氧基苯甲酰胺(12f)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-2，4-二氯苯甲酰胺(12g)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-2，4-二硝基苯甲酰胺(12h)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺(12i)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺(12g)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-2-苯乙酰胺(12k)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)肉桂酰胺(121)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺(12m)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-苯丙酰胺(12n)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-4-苯丁酰胺(12o)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-4-甲基戊酰胺(12p)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-苯基丙酰胺(12q)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-甲基丁酰胺(12r)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-甲基戊酰胺(12s)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)丙酰胺(12t)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-巯基丙酰胺(12u)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-羟基丙酰胺(12v)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-甲硫基丙酰胺(12w)、
(S)-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基丙基)-2-((S)-2-氨基-3-苯基丙酰胺基)-4-甲基戊酰胺(12x)或
(S)-2-氨基-N-((S)-1-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基氨基)-1-氧-3-苯基丙-2-基)-3-苯基丙酰胺(12y)。
2.本发明提供了一种制备化合物(I)的方法，其步骤如下：
以右旋氯酶胺1为原料，首先用N-叔丁氧羰基(Boc)保护氨基得化合物2，化合物2经选择性氧化得到中间体3；在二氯甲烷(DCM)中，以N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基苯并三氮唑(HOBT)作为复合缩和剂，中间体3与各种取代的胺反应，生成中间体4a～4t后，中间体4a～4m在盐酸乙酸乙酯饱和溶液中脱掉Boc保护基，得到化合物(I)系列中的化合物5a～5m；中间体3与各种氨基酸及二肽的甲酯盐酸盐反应得到中间体4n～4t，最后在NaOH溶液中，发生皂化反应，脱去羧基甲酯，并脱去氨基端的Boc保护基后得到化合物(I)系列中目标化合物5n～5t；其中中间体4n～4o羧基甲酯在在羟胺钾作用下，生成化合物6n～6o，并脱去氨基端的Boc保护基后得到(I)系列中目标化合物7n～7o。
合成路线参考以下路线1，可根据所要制备的某种具体的化合物结合本领域的现有技术进行设计。
路线1：
本发明提供了一种制备化合物(I)的方法，或者其步骤如下：
以化合物2为原料，经伯羟基选择性溴代得化合物8；化合物8与NaN3进行SN2取代反应，生成化合物9；化合物9用三苯基磷作还原剂，还原得中间体10；中间体10与各种羧酸或者Boc保护的氨基酸及二肽，以N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基苯并三氮唑(HOBT)作为复合缩和剂，得到中间体11a～11y，中间体11a～11y脱掉Boc保护基，生成(I)系列目标化合物12a～12y。
路线2
3.通式(I)的化合物在制备治疗肿瘤的药物中作为金属蛋白酶抑制剂的应用。
上述通式(I)化合物的体外抑酶试验如下：
目标化合物抑制明胶酶活性试验(体外)
MMPs抑制活性的测试描述于Vijaykumar，M.B.等，Matrix Biol.2000，19，26中。琥珀酰明胶己证明能被明胶酶(包括MMP-2，-9)水解，肽键水解产生的游离氨基浓度的高低与酶活性大小呈正相关。琥珀酸酐保护明胶中的游离氨基，水解后暴露的伯氨与2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)反应显色，通过检测450nm处的吸收度确定氨基含量，从而确定明胶酶的活性。试验原理及详细试验步骤参见CN 1528745A吡咯烷类基质金属蛋白酶抑制剂及其制备方法。
目标化合物抑制氨肽酶N的活性试验(体外)
APN抑制活性的测试描述于Lejczak，B等.Biochemistry，1989，28，3549中。底物L-亮氨酰-p-硝基苯胺被APN降解，产生在405nm有吸收的p-硝基苯胺，并且p-硝基苯胺的浓度与酶活性的大小呈正相关。通过检测405nm处的吸收度确定p-硝基苯胺的含量，从而确定氨肽酶的活性，间接反映出抑制剂对酶活性抑制程度的大小。试验原理及详细试验步骤参见CN1974554A环酰亚胺类肽金属蛋白酶抑制剂及其应用。
上述通式(I)化合物的体外抑制细胞增殖的活性试验如下：
化合物的细胞活性的测试使用MTT检测方法，HL-60细胞悬液接种于96孔板)，每孔中加入含不同浓度化合物的培养基，经孵育后，用MTT染色，继续孵育后，于酶标仪上在570nm处测定每孔的吸光度OD值，计算出细胞生长抑制率，从而确定化合物的活性。
人急性粒细胞白血病细胞HL60，由中科院上海细胞所引进。采用常规培养。实验时均用对数生长期细胞。将HL-60细胞悬液调整至1×105/ml，接种于96孔板(50μl/孔)，104个细胞/孔。铺板4h后，每孔中加入50ul含不同浓度化合物的培养基，使孔中化合物终浓度分别为：800、600、400、200、100ug/ml，每个浓度设三个复孔，不加细胞的孔读数时作空白，加细胞不加化合物的孔作化合物空白孔，bestatin作化合物阳性对照。于37℃，5％CO2中孵育48h，每孔加入10μl 0.5％的MTT染色液，继续孵育4h后，2500rpm，离心30min，然后抛板弃孔中培养基，加入DMSO，100ul/孔。酶标仪上于570nm处测定每孔的吸光度OD值，细胞生长抑制率按下式计算：
上述通式(I)化合物的构效关系研究如下：
应用软件Sybyl 7.0将(I)系列中具有最好活性的化合物5u与APN的活性区域进行对接，如图1所示，化合物5u的构型与乌苯美司(左图中深色结构)的构型在和APN的活性区域结合时有一定的相似性。5u可以很好地占据APN的疏水性口袋S1，S1’，S2’，同时结构中的羰基和氨基可以螯合APN活性区域的锌离子。图2是用Ligplot模拟的5u与APN对接的二维结构示意图，从图中我们可以得到，5u与APN催化中心的氨基酸保守序列(HEXXHX18E)的三个氨基酸His297，Glu298，His301分别形成了疏水键；另外5u与S2’中的Arg825也形成了
较强的离子健作用。这些结构特征为我们进行构效关系研究从而合理预期并设计具有更好抑
制活性的APN抑制剂提供了依据。
4.本发明还涉及含有通式(I)结构化合物的药物组合物。
一种药物组合物，包含(1)通式(I)的任一类肽化合物，和(2)一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
此外，本发明还包括一种适于口服给予哺乳动物的药物组合物，包含(1)通式(I)的任一类肽化合物，和(2)药学上可接受载体，任选包含(3)一种或多种药学上可接受的赋形剂。
此外，本发明还包括一种适于胃肠外给予哺乳动物的药物组合物，包含(1)通式(I)的任一类肽化合物，和(2)药学上可接受载体，任选包含(3)一种或多种药学上可接受的赋形剂。
本发明的乙二胺衍生物可以游离形式或以盐形式存在。本领域技术人员已知许多化合物类型的药学上可接受的盐及其制备方法。药学上可接受的盐包括常规的无毒性的盐，包括这样的化合物碱与无机或有机酸形成的季铵盐。
本发明的化合物可形成水合物或溶剂合物。本领域熟练人员已知将化合物与水一起冻干时所形成的水合物或在溶液中与合适的有机溶剂浓缩时形成溶剂合物的方法。
本发明包含含有治疗量本发明化合物的药物，和一种或多种药学上可接受载体和/或赋形剂的药物组合物。载体包括如盐水，缓冲盐水，葡萄糖，水，甘油，乙醇和它们的结合物，下文更详细地论述。如果需要，该组合物还可以包含较小量的润湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。该组合物可以是液体，悬浮液，乳剂，片剂，丸剂，胶囊，持续释放制剂或粉末。该组合物可以用传统的黏合剂和载体如三酸甘油酯配制成栓剂。口服制剂可以包括标准载体如药物品级的甘露糖醇，乳糖，淀粉，硬脂酸镁，糖精钠，纤维素和碳酸镁等等。视需要制剂而定，配制可以设计混合，制粒和压缩或溶解成分。在另一个途径中，该组合物可以配制成纳米颗粒。
使用的药物载体可以为，例如，固体或者液体。
典型的固体载体包括乳糖，石膏粉，蔗糖，滑石，凝胶，琼脂，果胶，阿拉伯胶，硬脂酸镁，硬脂酸等等。固体载体可以包括一种或多种可能同时作为增香剂，润滑剂，增溶剂，悬浮剂，填料，助流剂，压缩助剂，粘合剂或片剂-崩解剂的物质；它还可以是包封材料。在粉末中，载体为精细粉碎的固体，它与精细粉碎的活性成分的混合。在片剂中活性成分与具有必要的压缩性质的载体以合适的比例混合，以需要的形状和大小压缩。粉末和片剂优选包含至多99％活性成分。合适的固体载体包括，例如，磷酸钙，硬脂酸镁，滑石，糖，乳糖，糊精，淀粉，凝胶，纤维素，甲基纤维素，羧甲基纤维素钠盐，聚乙烯吡咯烷酮烷酮，低熔点蜡和离子交换树脂。
典型的液体载体包括糖浆，花生油，橄榄油，水，等等。液体载体用于制备溶液，悬浮液，乳剂，糖浆，酊剂和密封的组合物。活性成分可以溶解或悬浮于药学上可接受的液体载体如水，有机溶剂，二者的混合物或药学上可接受的油类或脂肪。液体载体可以包含其他合适的药物添加剂如增溶剂，乳化剂，缓冲剂，防腐剂，增甜剂，增香剂，悬浮剂，增稠剂，颜料，粘度调节剂，稳定形或渗透压-调节剂。用于口服和肠胃外给药的液体载体的合适的例子包括水(部分地包含如同上述的添加剂，例如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠盐溶液)，醇(包括一元醇和多元醇，例如乙二醇)和它们的衍生物，和油类(例如分馏椰子油和花生油)。用于肠胃外给药的载体还可以为油脂如油酸乙酯和异丙基肉豆蔻酸盐。无菌的液体载体用于肠胃外给药的无菌的液态组合物。用于加压组合物的液体载体可以为卤代烃或其他药学上可接受的推进剂。无菌溶液或悬浮溶液液体药物组合物可以用来，例如，静脉内，肌内，腹膜内或皮下注射。注射时可单次推入或逐渐注入，入30分钟的经脉内灌注。该化合物还可以以液体或者固体组合物的形式口服给药。
载体或赋形剂可以包括本领域已知的时间延迟材料，如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，还可包括蜡，乙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，异丁烯酸甲酯等等。当制剂用于口服时，公认PHOSALPG-50(phospholipid与1，2-丙二醇浓缩，A.Nattermann & Cie.GmbH)中的0.01％吐温80用于其他化合物的可接受的口服制剂的配制，可以适应于本发明各种化合物的配制。
给予本发明化合物时可以使用各式各样的药物形式。如果使用固体载体，制剂可以为片剂，被放入硬胶囊中的粉末或小药丸形式或锭剂或糖锭形式。固体载体的量在很大程度上变化，但是优选从约25mg到约1.0g。如果使用液体载体，制剂可以为糖浆，乳剂，软胶囊，在安瓿或小瓶或非水的液体悬浮液中的无菌注射溶液或悬浮液。
为了获得稳定的水溶性的剂型，可以将化合物或其药学上可接受的盐溶于有机或无机酸的水溶液，0.3M琥珀酸或柠檬酸溶液。选择性地，酸性的衍生物可以溶于合适的碱性溶液。如果得不到可溶形式，可将化合物溶于合适的共溶剂或它们的结合。这样的合适的共溶剂的例子包括，但是不局限于，浓度范围从0-60％总体积的乙醇，丙二醇，聚乙二醇300，聚山梨酸酯80，甘油，聚氧乙烯脂肪酸酯，脂肪醇或甘油羟脂肪酸酯等等。
各种释放系统是已知的并且可以用于化合物或其他各种制剂的给药，这些制剂包括片剂，胶囊，可注射的溶液，脂质体中的胶囊，微粒，微胶囊，等等。引入的方法包括但是不局限于皮肤的，皮内，肌内，腹膜内的，静脉内的，皮下的，鼻腔内的，肺的，硬膜外的，眼睛的和(通常优选的)口服途径。化合物可以通过任何方便的或者其它适当的途径给药，例如通过注入或快速浓注，通过上皮的或粘膜线路(例如，口腔粘膜，直肠和肠粘膜，等等)吸收或通过负载药物的支架以及可以于其他生物活性剂一起给药。可以全身或局部给药。用于鼻，支气管或肺疾病的治疗或预防时，优选的给药途径为口服，鼻给药或支气管烟雾剂或喷雾器。
5.本发明还提供了通式(I)的类肽化合物在制备预防或治疗与金属蛋白酶，包括基质金属蛋白酶或氨肽酶N，活性异常表达相关的哺乳动物疾病的药物的应用。所述的与金属蛋白酶活性异常表达的相关哺乳动物疾病包括：炎症，癌症，多发性硬化症，各种组织溃疡或组织溃疡性病症，牙周病，大疱性表皮松懈症，白血病等。
发明详述
本文中所用的术语和定义含义如下：
“杂烷基”指饱和或不饱和、含碳原子和至少一个杂原子的链，其中任意一个杂原子不相邻。杂烷基中含有2-15个原子(碳原子)，优选含有2-10个原子。杂烷基可以是直连或支链、取代或未取代的。
“芳基”是指芳族碳环基团。优选的芳环含有6-10个碳原子。
“卤”，或“卤素”包括氟、氯、溴或碘，优选氟和氯。
“环烷基”是取代或未取代的，饱和或不饱和的环状基团，其含有碳原子和/或一个或多个杂原子。该环可以是单环或稠环，桥环或螺环的环系。单环通常有3-9个原子，优选有4-7个原子，多环含有7-17个原子，优选含有7-13个原子。
“杂芳基”是芳族杂环，是含5-12个原子的单环或双环基团。较佳的杂芳基包括，例如噻吩基，呋喃基、吡咯基、吡啶基、吡嗪基、噻唑基、嘧啶基、喹啉基、以及四氮唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、吲哚基等。
“药学上可接受的盐”是指式(I)化合物具有疗效且无毒的盐形式。其可由任一酸性基团(如羧基)形成阴离子盐，或由任一碱性基团(如氨基)形成阳离子盐。本领域已知许多这样的盐。在任何酸性基团(如羧基)上形成的阳离子盐，或是在任何碱性基团(如氨基)上形成的阴离子盐。这些盐由许多式本领域已知的，如阳离子盐包括碱金属(如钠和钾)和碱土金属(如镁和钙)的盐以及有机盐(如铵盐)。还可通过使用相应的酸处理碱性形式的(I)方便地获得阴离子盐，这样的酸包括无机酸如硫酸、硝酸、磷酸等；或有机酸如乙酸、丙酸、羟基乙酸、2-羟基丙酸、2-氧代丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、2-羟基-1，2，3-丙三酸、甲磺酸、乙磺酸、苯甲磺酸、4-甲基苯磺酸、环己基亚磺酸、2-羟基苯甲酸、4-氨基-2-羟基苯甲酸等。这些盐是熟练技术人员熟知的，熟练的技术人员可制备本领域知识所提供的任何盐。此外，熟练技术人员可根据溶解度、稳定性、容易制剂等取某种盐而舍另一种盐。这些盐的测定和最优化在熟练技术人员的经验范围内。
“溶剂合物”是溶质(如金属蛋白酶抑制剂)和溶剂(如水)组合形成的配合物。参见J.Honig等，The VanNostrand Chemist’s Dictionary，p.650(1953)。本发明采用的药学上可接受的溶剂包括不干扰金属蛋白酶抑制剂的生物活性的那些溶剂(例如水、乙醇、乙酸、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜以及该领域技术人员所知的或容易确定的溶剂)。
本文所用的“光学异构体”、“对映体”、“非对映体”、“消旋体”等定义了本发明化合物或其生理上的衍生物所有可能的立体异构体的形式。除非另有指示，本发明化合物的化学命名包括所有可能的立体化学形式的混合物，所属混合物包含基本结构分子的所有非对映体和对映体，以及基本纯净的本发明化合物的单个异构体形式，即其中含有低于10％，优选低于5％，特别是低于2％，最优选低于1％的其它异构体。本发明类肽化合物各种立体异构体形式均明显包含于本发明的范围内。
式(I)类肽化合物还可以其它被保护的形式或衍生物的形式存在，这些形式对本领域技术人员而言是显而易见的，均应该包含于本发明的范围内。
如上所述的取代基自身还可被一个或多个取代基取代。这样的取代基包括在C.Hansch和A.Leo，Substituent Constants for Correlation Analysis in Chemistry and Biology(1979)中列出的那些取代基。优选的取代基包括，例如烷基，烯基，烷氧基，羟基，氧基，硝基，氨基，氨基烷基(如氨甲基等)，氰基，卤，羧基，羰基烷氧基(如羰基乙氧基等)，硫基，芳基，环烷基，杂芳基，杂环烷基(如哌啶基，吗啉基，吡咯基等)，亚氨基，羟烷基，芳基氧基，芳基烷基，及其结合。
附图说明
图1为化合物(S)-2-((S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰氨)-3-苯丙酰氨)-3-苯丙氨酸(5u)与APN的活性区域对接结果通过Sybyl 7.0以三维显示示意图。
图2为化合物(S)-2-((S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰氨)-3-苯丙酰氨)-3-苯丙氨酸(5u)与APN的活性区域对接结果通过Ligplot以二维显示示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，但不限于此。
实施例1.(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙胺)-4-甲基戊酸(5n)的合成
(1)(1S，2S)-2-N-叔丁氧羰基胺基-1-(4-硝基苯基)-1，3-丙二醇(2)
将右旋氯酶胺(1)(2.12g，10mmol)溶于10mL无水THF中，室温搅拌下，缓慢滴加入滴加二碳酸二叔丁酯(2.93g，11mmol)的THF溶液(5mL)，室温反应24h。过滤不溶物，用旋转蒸发仪减压蒸去溶剂，冷却析晶，得到白色固体粗2.80g，产率90％，mp115～116℃。(2)(2R，3S)-2-叔丁氧羰基胺基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酸(3)
将化合物2(3.12g，10mmol)和TEMPO(0.16g，1mmol)溶于50ml的丙酮中，搅拌下，加入5％的NaHCO3(50ml)，溶液变浑浊，冰浴冷却反应液到0℃，15min内滴加NaOCl溶液(20.5mL，ca.10％w/w)。滴加完后，搅拌反应12小时，减压蒸除丙酮后，反应液用EtOAc(10mL)洗涤两次，1mol/L的磷酸溶液酸化至pH为2，EtOAc(3×30mL)，萃取，合并有机相用Na2SO4干燥后，减压浓缩得粗品。柱层析纯化得到最终产物为白色固体0.97g，产率30％，mp80～82℃。
(3)(S)-甲基-2-((2R，3S)-2-(叔-丁氧羰基氨基)-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙胺)-4-甲基戊酯(4n)
将化合物3(3.26g，10mmol)，亮氨酸甲酯盐酸盐(1.81g，10mmol)，和HOBt(1.62g，12mmol)溶解于150ml无水二氯甲烷中，滴加入TEA(2.22g，22mmol，)冰浴冷却至0℃，缓慢滴加EDCI(3.82g，20mmol)的二氯甲烷溶液，约1h滴加完毕，撤去冰浴室温继续搅拌过夜。反应液先后以1mol/L的柠檬酸，饱和NaHCO3，饱和盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，柱层析纯化得到纯品，为白色固体4.08g，产率88.7％，mp141～143℃，ESI-MS m/z：454.3[M+H]+。
(4)(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙胺)-4-甲基戊酸(5n)
将化合物4n(4.53g，10mmol)容易100ml甲醇中，冷却至5℃，搅拌下缓慢滴加12ml的1mol/L的NaOH溶液，滴加完后，搅拌反应6h，蒸除甲醇，加入20ml蒸馏水，用1mol/L的磷酸溶液调节反应液为酸性pH为1，有大量白色固体析出，静置1h，过滤，滤渣用蒸馏水洗涤，干燥后得白色固体。冰浴下，所得固体粉沫，溶于无水乙酸乙酯(10ml)，滴加HCl/EtOAc饱和溶液，继续搅拌12h，TLC检测反应，反应完毕后，蒸除溶剂，重新加入10ml乙酸乙脂，蒸去溶剂。加入10ml的蒸馏水，用饱和Na2CO3溶液调节pH值为6，有白色固体析出。静置过滤，滤渣用蒸馏水洗涤两遍，真空干燥后为白色固体粗品。甲醇重结晶的纯品为白色晶体3.20g，产率60％，mp 203～205℃。ESI-MS m/z：340.4[M+H]+；1H-NMR(DMSO-d6)δ 0.731(d，J＝12.10，6H)，1.121-1.142(m，1H)，1.336-1.354(m，2H)，3.417(d，J＝4.50，1H)，4.094-4.113(m，1H)，4.882(d，J＝4.50，1H)，7.631(d，J＝8.70，2H)，8.092(d，J＝7.50，1H)，8.180(d，J＝8.70，2H).
实施例2.(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺)-N-羟基-4-甲基戊酰胺(7n)的合成
将化合物4n(4.53g，10mmol)，溶于20ml的无水甲醇中，搅拌下室温滴加10ml的1.5mol/L的H2N-OK溶液，滴加完毕后，持续搅拌50min，用醋酸调节pH值为7，减压蒸除甲醇后，得淡黄色固体。柱分离的得6n，纯品为白色固体mp150～153℃。将所得固体粉沫，溶于无水乙酸乙酯(10ml)，滴加HCl/EtOAc饱和溶液，继续搅拌12h，TLC检测反应，反应完毕后，蒸除溶剂，重新加入10ml乙酸乙脂，蒸去溶剂。加入10ml的蒸馏水，用饱和Na2CO3溶液调节pH值为6，有白色固体析出。静置过滤，滤渣用蒸馏水洗涤两遍，真空干燥后为白色固体7n粗品。重结晶后纯品为白色晶体3.20g，产率74.2％，mp212～213℃。ESI-MS m/z：355.6[M+H]+；1H-NMR(DMSO-d6)δ 0.548-0.609(m，6H)，0.701-0.811(m，1H)，0.911-1.198(m，2H)，3.967(d，J＝3.50，1H)，4.063-4.081(m，1H)，4.968(d，J＝3.50，1H)，7.651(d，J＝8.70，2H)，8.244(d，J＝8.70，2H)，8.746(d，J＝8.10，2H).
实施例3.(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-4-甲基戊酰胺(12p)的合成
(1)(1S，2R)-2-N-叔丁氧羰基胺基-3-溴-1-(4-硝基苯基)-1-丙醇的制备(8)
在250mL的圆底烧瓶中，加入化合物2(3.12g，10mmol)，Ph3P(3.93g，15mmol)，用100mL无水THF溶解，然后将烧瓶浸入冰盐浴中，搅拌，量取0.8ml吡啶(0.79g，10mmol)滴加至溶液中，分三次加入NBS固体(2.67g，15mmol)。冰盐浴下搅拌反应1h，撤去冰浴室温反应8h。过滤不溶物，用旋转蒸发仪减压蒸去溶剂，残留物中加入100ml乙醚，静置1h，过滤，滤液依次用1mol/LH3PO4，饱和NaHCO3，饱和食盐水洗涤两次，无水Na2SO4干燥。过滤，用旋转蒸发仪浓缩，得到红棕色油状物，粗品柱分离，得白色结晶1.87g，产率50％，mp116～119℃。
(2)(1S，2S)-2-N-叔丁氧羰基胺基-3-叠氮-1-(4-硝基苯基)-1-丙醇的制备(9)
将化合物8(3.75g，10mmol)溶于10mL无水DMF中，加入(0.97g，15mmol)研细的NaN3，在氮气保护55℃～60℃下，该混合体系下搅拌反应12h。反应液冷至室温，倾入60ml得冰水中，用玻璃棒快速搅拌，可见白色结晶析出。静置2小时，抽滤，滤渣用蒸馏水洗涤两次，真空干燥得白色结晶2.93g，产率87％，mp 143～145℃。
(3)(1S，2S)-2-N-叔丁氧羰基胺基-3-氨基-1-(4-硝基苯基)-1-丙醇的制备(10)
将化合物9(3.37g，10mmol)溶解在THF(80mL，0.5％water)后，加入三苯基磷(3.14g，12mmol).反应液室温搅拌24小时。减压蒸去溶剂，加入40ml乙酸乙脂溶解残留物，1mol/L的H3PO4溶液萃取有机相三次，每次10ml，合并有水相，1mol/L的NaOH调节pH值到10，水相用乙酸乙脂萃取三次，每次20ml。合并乙酸乙脂，无水Na2SO4干燥。过滤，用旋转蒸发仪浓缩，得到淡黄色固体粗品，乙醚重结晶得纯品2.27g，产率73％，mp 197～201℃。
(4)(1S，2S)-2-N-叔丁氧羰基胺基-3-氨基-1-(4-硝基苯基)-1-丙醇的制备(12p)
将化合物10(3.11g，10mmol)，Boc-Leu(2.31g，10mmol)，和HOBt(1.62g，12mmol)溶解于150ml无水二氯甲烷中，滴加入TEA(2.22g，22mmol，)冰浴冷却至0℃，缓慢滴加EDCI(3.82g，20mmol)的二氯甲烷溶液，约1h滴加完毕，撤去冰浴室温继续搅拌过夜。反应液先后以1mol/L的柠檬酸，饱和NaHCO3，饱和盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，柱层析纯化得到纯品11p，为白色固体3.43g，产率65.4％，mp 200～203℃，ESI-MS m/z：525.3[M+H]+。
冰浴下，化合物11p(2.07g，5mmol)溶于无水乙酸乙酯(10ml)，滴加HCl/EtOAc饱和溶液，继续搅拌，10min后有白色固体析出。TLC检测反应，反应完毕后，蒸除溶剂，重新加入10ml乙酸乙脂，蒸去溶剂。加入10ml的蒸馏水，用饱和Na2CO3溶液调节pH值为10，有白色固体析出。静置过滤，滤渣用蒸馏水洗涤两遍，真空干燥后为白色固体7n粗品。重结晶后纯品12p为白色晶体1.06g，产率65.9％，mp 160～163℃，ESI-MS m/z：325.3[M+H]+；1H-NMR(DMSO-d6)δ 0.886-0.906(m，6H)，1.592-1.553(m，2H)，1.554-1.573(m，1H)，3.097-3.143(m，1H)，3.481-3.549(m，1H)，3.737(m，1H)，4.970(d，J＝3.50，1H)，6.649(d，J＝3.50，1H)，7.750(d，J＝8.70，2H)，8.241(m，1H)，8.250(s，2H)，8.433(s，2H)，8.260(d，J＝8.70，2H)，8.746(d，J＝8.10，2H).9.145(s，1H).
实施例4 抑酶试验
(I)系列化合物体外抑酶试验结果如下：
体外抑酶试验结果表1
体外抑酶试验结果表2
体外抑酶试验结果表3
表中数值为三次试验的平均值，“±”后的数值表示标准偏差。
上表测试数据表明：2-氨基-1-(4-硝基苯基)-1-乙醇类化合物均显示出对金属蛋白酶APN和MMP一定的抑制活性。其中，化合物12u，12w，12y，5t显示出较好的抑制氨肽酶N活性(IC50＝4.3～21.3μmol.L-1)，接近阳性对照Bestatin的抑制活性(IC50＝3.0μmol.L-1)，有进一步研究的价值。
实施例5 目标化合物抑制细胞增殖的活性试验(In vitro)
化合物(I)中的部分化合物(IC50<60μmol/L)进行了体外抑制HL-60癌细胞增殖的试验，结果如下：化合物IC50(mmol/L)
表4：
| 化合物 | IC50(mM) | 化合物 | IC50(mM) |
| 乌苯美司 | 1.65±0.09 | ||
| 7n | 0.98±0.08 | 5s | 2.02±0.13 |
| 7o | 0.51±0.11 | 5t | 2.21±0.11 |
表中数值为三次试验的平均值，“±”后的数值表示标准偏差。
从结果可以看出，化合物7n、7o、5s和5t在体外抗肿瘤细胞增殖的试验中显示出较强的活性，有望成为非细胞毒类抗癌候选药物。
Claims (10)
1.通式I化合物及其药用盐，
其中，W为C(O)NH或CH2NHC(O)；
R1是芳基，杂芳基，芳基C1-6烷基，杂芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，杂芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基，杂芳基C2-6炔基或C1-6烷基，任选被一个或多个如下基团取代：羟基，卤素，硝基，氰基，芳基，取代芳基，卤C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基，C1-8烷氧羰基或芳基C1-8烷氧羰基；
R2是氢，芳基，杂芳基，芳基C1-6烷基，杂芳基C1-9烷基，芳基C2-6烯基，杂芳基C2-6烯基，芳基C2-6炔基或杂芳基C2-6炔基，任选被一个或多个如下基团取代：卤素，硝基，氰基，卤C1-8烷基，C1-8烷氧基，C1-6烷基羰基或C1-8烷氧羰基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于：式(I)中*所示的碳具有(1S，2R)构型，或者具有(1R，2S)构型。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于：R1是芳基C1-6烷基，优选苄基，β芳乙基，γ芳丙基，C端保护或未保护天然或非天然氨基酸衍生物，任选被一个或多个如下基团取代：羟基，卤素，硝基，氰基，C1-8烷氧基。
4.如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于：R2是氢。
5.如权利要求1或2的化合物，其是下列之一：
(2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)-N-丙基丙酰胺(5a)、
(2R，3S)-2-氨基-3-羟基-N-异丙基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5b)、
(2R，3S)-2-氨基-N-丁基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5c)、
(2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)-N-戊基丙酰胺(5d)、
(2R，3S)-2-氨基-N-环己基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5e)、
(2R，3S)-2-氨基-N-苄基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙胺(5f)、
(2R，3S)-2-氨基-N-(4-氟苄基)-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5g)、
(2R，3S)-2-氨基-N-(4-甲氧基苄基)-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5h)、
(2R，3S)-2-氨基-N-(苯乙基)-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5i)、
(2R，3S)-2-氨基-N-(2-氯苯乙基)-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5j)、
(2R，3S)-2-氨基-N-(2-羟基苯乙基)-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5k)、
(2R，3S)-2-氨基-3-羟基-N-((S)1-羟基-3-苯丙基-2-基)-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5l)、
(2R，3S)-2-氨基-3-羟基-N-((S)1-羟基-3-苯丙基-2-基)-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(5m)、
(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙胺)-4-甲基戊酸(5n)、
(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺)-3-苯丙酸(5o)、
(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺)-3-甲基丁酸(5p)、
(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺)-3-甲基丁酸(5q)、
(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺)-3-(1H-吲哚-2-基)丙酸(5r)、
(S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺)-N-羟基-4-甲基戊酰胺(7n)、
(2R，3S)-2-氨基-3-羟基-N-((S)-1-(羟氨基)-1-氧-3-苯丙烷-2-基)-3-(4-硝基苯基)丙酰胺(7o)、
(S)-2-((S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰胺)-4-甲基戊酰胺)-3-苯丙酸(5s)、
(S)-2-((S)-2-((2R，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酰氨)-3-苯丙酰氨)-3-苯丙氨酸(5t)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)苯甲酰胺(12a)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-2-甲基苯甲酰胺(12b)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-2-氯苯甲酰胺(12c)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-2-氯苯甲酰胺(12d)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-4-硝基苯甲酰胺(12e)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-4-甲氧基苯甲酰胺(12f)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-2，4-二氯苯甲酰胺(12g)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-2，4-二硝基苯甲酰胺(12h)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3，4，5-三甲氧基苯甲酰胺(12i)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3，4，5-三羟基苯甲酰胺(12g)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-2-苯乙酰胺(12k)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)肉桂酰胺(12l)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺(12m)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-苯丙酰胺(12n)、
N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-4-苯丁酰胺(12o)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-4-甲基戊酰胺(12p)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-苯基丙酰胺(12q)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-甲基丁酰胺(12r)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-甲基戊酰胺(12s)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)丙酰胺(12t)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-巯基丙酰胺(12u)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-羟基丙酰胺(12v)、
(S)-2-氨基-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基)-3-甲硫基丙酰胺(12w)、
(S)-N-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基丙基)-2-((S)-2-氨基-3-苯基丙酰胺基)-4-甲基戊酰胺(12x)或
(S)-2-氨基-N-((S)-1-((2S，3S)-2-氨基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙基氨基)-1-氧-3-苯基丙-2-基)-3-苯基丙酰胺(12y)。
6.制备权利要求1或2所述化合物的中间体，其是(2R，3S)-2-叔丁氧羰基胺基-3-羟基-3-(4-硝基苯基)丙酸，或者是(1S，2S)2-N-叔丁氧羰基胺基-3-氨基-1-(4-硝基苯基)-1-丙醇。
7.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
以右旋氯酶胺(1)为原料，首先用N-叔丁氧羰基(Boc)保护氨基得化合物(2)，化合物(2)经选择性氧化得到中间体(3)；在二氯甲烷(DCM)中，以N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基苯并三氮唑(HOBT)作为复合缩和剂，中间体(3)与各种取代的胺反应，生成中间体(4a～4t)后，中间体(4a～4m)在盐酸乙酸乙酯饱和溶液中脱掉Boc保护基，得到化合物(I)系列中的化合物(5a～5m)；中间体(3)与各种氨基酸及二肽的甲酯盐酸盐反应得到中间体(4n～4t)，最后在NaOH溶液中，发生皂化反应，脱去羧基甲酯，并脱去氨基端的Boc保护基后得到化合物(I)系列中目标化合物(5n～5t)；其中中间体(4n～4o)羧基甲酯在在羟胺钾作用下，生成化合物(6n～6o)，并脱去氨基端的Boc保护基后得到(I)系列中目标化合物(7n～7o)；
反应式如下：
8.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
以化合物(2)为原料，经伯羟基选择性溴代得化合物(8)；化合物(8)与NaN3进行SN2取代反应，生成化合物(9)；化合物(9)用三苯基磷作还原剂，还原得中间体(10)；中间体(10)与各种羧酸或者Boc保护的氨基酸及二肽，以N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基苯并三氮唑(HOBT)作为复合缩和剂，得到中间体(11a～11y)，中间体(11a～11y)脱掉Boc保护基，生成(I)系列目标化合物(12a～12y)；
反应式如下：
9.权利要求1-5任一项化合物在制备预防或治疗与金属蛋白酶，包括基质金属蛋白酶或氨肽酶N，活性异常表达相关的哺乳动物疾病的药物中的应用；所述的与金属蛋白酶活性异常表达的相关哺乳动物疾病包括：炎症，癌症，多发性硬化症，各种组织溃疡或组织溃疡性病症，牙周病，大疱性表皮松懈症和白血病。
10.一种药物组合物，包含权利要求1-5任一项的化合物和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
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